LAMA4の構造組織、ラミニンalpha4をコードする遺伝子

ラミニンalpha4鎖をコードする遺伝子であるLAMA4の完全な構造配置を決定しました。酵母人工染色体クローンとcDNA配列に由来する総ヒトゲノムDNAとプライマーの両方を使用して、遺伝子の領域を増幅および配列決定して、スプライスドナーとアクセプター部位を決定しました。イントロンは、PCR産物のアガロースゲル電気泳動によりサイズがありました。遺伝子は、122 kbにまたがる39のエクソンで構成されていました。すべてのスプライス部位は、ドナースプライス部位にGCジヌクレオチドを持っていたイントロン7を除き、GT/AGルールに準拠していました。イントロン/エクソンの比率は、主に遺伝子の5 '末端での大きなイントロンによる17.8：1で大きかった。遺伝子の5 'および3'末端の両方の領域を酵母人工染色体からサブクローニングして、非転写DNAを配列決定できるようにしました。この遺伝子は、特徴付けられるラミニンA遺伝子ファミリーの2番目を表し、その構造組織はLAMA2遺伝子の同等の領域に似ています。

We have determined the complete structural arrangement of LAMA4, the gene encoding the laminin alpha4 chain. Using both yeast artificial chromosome clones and total human genomic DNA and primers derived from the cDNA sequence, regions of the gene were amplified and sequenced to determine the splice donor and acceptor sites. The introns were sized by agarose gel electrophoresis of the PCR products. The gene consisted of 39 exons spanning 122 kb. All of the splice sites conformed to the GT/AG rule, except intron 7 which possessed a GC dinucleotide at the donor splice site. The intron/exon ratio was large at 17.8:1, mainly due to large introns at the 5' end of the gene. Regions at both the 5' and 3' end of the gene were subcloned from the yeast artificial chromosomes to enable untranscribed DNA to be sequenced. The gene represents the second of the laminin A gene family to be characterised and its structural organisation is similar to the equivalent regions of the LAMA2 gene.