大腸菌からメチルDNA制限ストレプトマイセ感染症へのプラスミドDNAの高効率の関節導入

S. coelicolor A3（2）を含む多くのストレプトマイセテは、異種DNAの導入に効果的な障壁を示す強力なメチル特異的制限を備えています。2つの大腸菌ドナーを使用して、さまざまな種類のプラスミドのS. coelicolorおよびS. lividans 66の遺伝子間夫婦移動の効率を比較しました。。メチル化不足ドナーは、標準ドナーよりも10倍以上のS. coelicolor exconjugantsを獲得できることを実証します。部位特異的組換えにより宿主染色体に統合されるPSET152誘導体の場合、共役混合物中のストレプトマイセット胞子の最大10％がプラスミドを受け取ります。共役手順は、「自殺」送達プラスミドを備えたexconjugantを得るのに十分効率的であるため、メチルDNA制限ストレプトマイセテ、およびおそらく他の細菌において遺伝子破壊を伝導するための簡単なルートを提供します。

Many streptomycetes, including S. coelicolor A3(2), possess a potent methyl-specific restriction which can present an effective barrier to the introduction of heterologous DNA. We have compared the efficiency of intergeneric conjugal transfer of different types of plasmids to S. coelicolor and S. lividans 66 using two E. coli donors: the standard, methylation proficient strain S17-1, and the methylation deficient donor, ET12567(pUB307). We demonstrate that the methylation deficient donor can yield > 10(4)-fold more S. coelicolor exconjugants than the standard donor. In the case of pSET152 derivatives, which integrate into the host chromosome by site-specific recombination, up to 10% of streptomycete spores in the conjugation mixture inherit the plasmid. The conjugation procedure is efficient enough to obtain exconjugants with 'suicide' delivery plasmids and therefore provides a simple route for conducting gene disruptions in methyl DNA-restricting streptomycetes, and possibly other bacteria.