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Journal of bacteriology1997Nov01Vol.179issue(21)

ラルストニア(シュードモナス)の変異体抗菌ペプチドに敏感なソラナセアラムは、リポ多糖構造で変化しており、タバコではあいまいです

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文献タイプ:
  • Journal Article
  • Research Support, Non-U.S. Gov't
概要
Abstract

Ralstonia solanacearum K60はトランスポゾンTN5で突然変異し、2つの変異体、M2とM88を分離しました。両方の変異体は、チオニンに対する感受性の増加に基づいて選択され、34 bp離れた同じ遺伝子にTN5挿入がありました。中断された遺伝子の配列分析は、大腸菌およびサルモネラチフミュリウムのRFAF遺伝子(66%の類似性)との明確な相同性を示し、リポ多糖(LPS)コアの合成に関与するヘプトシルトランスフェラーゼをコードします。変異体M2とM88には、LPS電気泳動パターンが変化しており、不完全なLPSコアの合成と一致していました。これらの理由により、R。solanacearum遺伝子はRFAFと呼ばれました。変異体は、精製された脂質移動タンパク質(LTP)およびタバコの葉からのLTPが豊富な細胞壁抽出物にも敏感でした。ミュータントM2とM88は、プランタナで急速に死亡し、タバコの葉に浸透したときに壊死を起こすことができず、タバコの茎に注入されたときにしおれを引き起こしました。補完された株M2*およびM88*は、遺伝子RFAFを抱えるDNAフラグメントによる形質転換により、それぞれ変異体M2およびM88から得られました。彼らは異なる程度の野生型の再構成表現型を持っていました。両方の株は変異体の粗い表現型を保持し、それらのLPS電気泳動パターンは野生型と変異体のものの間の中間でした。

Ralstonia solanacearum K60はトランスポゾンTN5で突然変異し、2つの変異体、M2とM88を分離しました。両方の変異体は、チオニンに対する感受性の増加に基づいて選択され、34 bp離れた同じ遺伝子にTN5挿入がありました。中断された遺伝子の配列分析は、大腸菌およびサルモネラチフミュリウムのRFAF遺伝子(66%の類似性)との明確な相同性を示し、リポ多糖(LPS)コアの合成に関与するヘプトシルトランスフェラーゼをコードします。変異体M2とM88には、LPS電気泳動パターンが変化しており、不完全なLPSコアの合成と一致していました。これらの理由により、R。solanacearum遺伝子はRFAFと呼ばれました。変異体は、精製された脂質移動タンパク質(LTP)およびタバコの葉からのLTPが豊富な細胞壁抽出物にも敏感でした。ミュータントM2とM88は、プランタナで急速に死亡し、タバコの葉に浸透したときに壊死を起こすことができず、タバコの茎に注入されたときにしおれを引き起こしました。補完された株M2*およびM88*は、遺伝子RFAFを抱えるDNAフラグメントによる形質転換により、それぞれ変異体M2およびM88から得られました。彼らは異なる程度の野生型の再構成表現型を持っていました。両方の株は変異体の粗い表現型を保持し、それらのLPS電気泳動パターンは野生型と変異体のものの間の中間でした。

Ralstonia solanacearum K60 was mutagenized with the transposon Tn5, and two mutants, M2 and M88, were isolated. Both mutants were selected based on their increased sensitivity to thionins, and they had the Tn5 insertion in the same gene, 34 bp apart. Sequence analysis of the interrupted gene showed clear homology with the rfaF gene from Escherichia coli and Salmonella typhimurium (66% similarity), which encodes a heptosyltransferase involved in the synthesis of the lipopolysaccharide (LPS) core. Mutants M2 and M88 had an altered LPS electrophoretic pattern, consistent with synthesis of incomplete LPS cores. For these reasons, the R. solanacearum gene was designated rfaF. The mutants were also sensitive to purified lipid transfer proteins (LTPs) and to an LTP-enriched, cell wall extract from tobacco leaves. Mutants M2 and M88 died rapidly in planta and failed to produce necrosis when infiltrated in tobacco leaves or to cause wilting when injected in tobacco stems. Complemented strains M2* and M88* were respectively obtained from mutants M2 and M88 by transformation with a DNA fragment harboring gene rfaF. They had a different degree of wild-type reconstituted phenotype. Both strains retained the rough phenotype of the mutants, and their LPS electrophoretic patterns were intermediate between those of the wild type and those of the mutants.

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