タンパク質チロシンキナーゼSRCによるB細胞抗原受容体媒介シグナル伝達のキナーゼ非依存性増強

B細胞Ag受容体によって媒介されるシグナル伝達は、SRCファミリーのメンバーである複数のタンパク質チロシンキナーゼ（すなわち、Fyn、Lyn、BLK、LCK）の活性化を伴います。SRCファミリーのメンバーが、B細胞Ag受容体を介してシグナル伝達を増強できるようにする共通の物理的および/または酵素的特性を持っているかどうかを判断するために、Bリンパ腫細胞株K46-17 Mu Mラムダでタンパク質チロシンキナーゼSRCを発現しました。共沈降分析と2色の免疫蛍光に基づいて、この異種SRCファミリーキナーゼは、B細胞AG受容体と物理的に関連することが観察されました。追加の実験により、B細胞Ag受容体の架橋により、チロシンのリン酸化とSRCの活性化が増加することが示されました。細胞内基質のチロシンリン酸化、カルシウムの動員、転写因子の活性化を含むB細胞活性化のいくつかのパラメーターは、コントロール細胞と比較した場合にSRCを発現する細胞で増強されました。SRCによるAg受容体媒介シグナル伝達の増強がその触媒活性に依存しているかどうかを判断するために、K46-17 Mu m Lambda細胞でキナーゼ欠損型SRCが発現しました。キナーゼ欠損SRCを発現するトランスフェクタントは、野生型SRCを発現するトランスフェクタントに匹敵するB細胞AG受容体を介した刺激に対する応答性の向上を示しました。さらに、キナーゼ欠損SRCは、活性化依存的に内因性キナーゼLynと関連することが観察されました。これらの発見は、SRCファミリーのメンバーが、Ag受容体活性化複合体へのキナーゼ動員の増幅を伴うキナーゼ非依存性メカニズムを介してAg受容体を介したシグナル伝達を増強することができることを示しています。

Signal transduction mediated by the B cell Ag receptor involves the activation of multiple protein tyrosine kinases that are members of the Src family (i.e., Fyn, Lyn, Blk, Lck). To determine whether members of the Src family possess common physical and/or enzymatic properties that enable them to potentiate signal transduction via the B cell Ag receptor, we expressed the protein tyrosine kinase Src in the B lymphoma cell line K46-17 mu m lambda. Based on coprecipitation analysis and two-color immunofluorescence, this heterologous Src family kinase was observed to physically associate with the B cell Ag receptor. Additional experiments demonstrated that B cell Ag receptor cross-linking results in increased tyrosine phosphorylation and activation of Src. Several parameters of B cell activation, including tyrosine phosphorylation of intracellular substrates, calcium mobilization, and transcription factor activation, were potentiated in cells that expressed Src when compared with control cells. To determine whether potentiation of Ag receptor-mediated signaling by Src was dependent on its catalytic activity, a kinase-deficient form of Src was expressed in K46-17 mu m lambda cells. Transfectants expressing kinase-deficient Src exhibited an enhanced responsiveness to stimulation through the B cell Ag receptor that was comparable with transfectants expressing wild-type Src. Additionally, kinase-deficient Src was observed to associate with the endogenous kinase Lyn in an activation-dependent manner. These findings indicate that members of the Src family may potentiate Ag receptor-mediated signaling via a kinase-independent mechanism(s) that involves amplification of kinase recruitment to the Ag receptor activation complex.