AUX/IAAタンパク質は、天然で非常に活性な合成オーキシン応答要素を含むレポーター遺伝子の発現を抑制します

DR5と呼ばれる非常に活性な合成オーキシン応答要素（AUXRE）は、大豆GH3プロモーターに見られる天然複合補助術で部位指向の変異を実行することによって作成されました。DR5は、オーキシン応答性TGTCTC要素を含む11 bpのタンデム直接リピートで構成されていました。DR5 AUXREは、ニンジンプロトプラストまたは安定的に形質転換されたシロイヌナズナの苗木での一時的な発現によってアッセイされた場合、天然複合材の補助とGH3プロモーターよりも大きなオーキシン応答性を示し、野生型植物および野生型植物におけるオーキシン応答性転写を研究するための有用なレポーター遺伝子を提供しますミュータント。in vitroでdr5 auxreに特異的に結合し、酵母2ハイブリッド系のaux/iaaタンパク質と相互作用したオーキシン応答転写因子Arf1が結合しました。AUX/IAAタンパク質をコードする天然および合成AUXREレポーター遺伝子およびエフェクター遺伝子を使用した共輸送実験により、ニンジンプロトプラストにおけるAUX/IAAタンパク質の過剰発現がTGTCTC AUXREレポーター遺伝子発現の特定の抑制をもたらすことが示されました。

A highly active synthetic auxin response element (AuxRE), referred to as DR5, was created by performing site-directed mutations in a natural composite AuxRE found in the soybean GH3 promoter. DR5 consisted of tandem direct repeats of 11 bp that included the auxin-responsive TGTCTC element. The DR5 AuxRE showed greater auxin responsiveness than a natural composite AuxRE and the GH3 promoter when assayed by transient expression in carrot protoplasts or in stably transformed Arabidopsis seedlings, and it provides a useful reporter gene for studying auxin-responsive transcription in wild-type plants and mutants. An auxin response transcription factor, ARF1, bound with specificity to the DR5 AuxRE in vitro and interacted with Aux/IAA proteins in a yeast two-hybrid system. Cotransfection experiments with natural and synthetic AuxRE reporter genes and effector genes encoding Aux/IAA proteins showed that overexpression of Aux/IAA proteins in carrot protoplasts resulted in specific repression of TGTCTC AuxRE reporter gene expression.