シクロブタンピリミジン二量体は、DNA修復欠損トリコチオダジオ症細胞の主要な変異原性DNA光生成物です

複製シャトルベクターPR2を使用して、紫外線C（UVC）誘発シクロブタンピリミジン二量体（CPD）の役割を決定しました。野生型XPD/ERCC2修復遺伝子（TTD + ERCC2細胞）。ヒト細胞でトランスフェクションの前に、UVC照射ベクターDNAをAnacyStis nidulansフォトリアーゼ[光反応性（PR）手順]で処理し、CPDを選択的に除去し、非照射器の光プロダクトを無効にしました。PRによって処理されたUV照射PR2プラスミドの変異頻度は、TTDまたはTTD + ERCC2細胞での複製後に類似していた。この結果は、TTD細胞がTTD細胞が野生型修復遺伝子を補完するのと同じくらい効率的に非Dimer光プロダクトを修復することができ、TTD細胞ではCPDがUVC照射後に変異頻度の増加を生成する主要な光生成物であることを示しています。300を超える変異プラスミドの配列分析は、DNAのPRがタンデム変異の相対レベルを増加させ、TTD細胞の複数の変異の相対レベルを減少させることを示しました。両方の細胞株において、CPDは主にGC-AT遷移につながったことが観察されました。一方、TTDおよびTTD + ERCC2細胞におけるGC-TAトランサージングの誘導の原因は、Nondimer光プロダクトのみでした。

We have used the replicating shuttle vector pR2 to determine the role of ultraviolet C (UVC)-induced cyclobutane pyrimidine dimers (CPDs) and nondimer photoproducts in mutagenesis in human trichothiodystrophy (TTD) cells and in their repair-proficient counterparts obtained after complementation with the wild-type XPD/ERCC2 repair gene (TTD + ERCC2 cells). Before transfection in human cells, the UVC-irradiated vector DNA was treated with Anacystis nidulans photolyase [photoreactivation (PR) procedure] that selectively removed CPDs, leaving nondimer photoproducts intact. The mutant frequency of the UV-irradiated pR2 plasmid treated by PR was similar after replication in TTD or in TTD + ERCC2 cells. This result indicates that TTD cells were able to repair nondimer photoproducts as efficiently as TTD cells complemented with the wild-type repair gene and that in TTD cells, CPDs were the major photoproducts generating an increased mutant frequency after UVC irradiation. Sequence analysis of > 300 mutant plasmids indicated that PR of the DNA increased the relative level of tandem mutations and decreased the relative level of multiple mutations in TTD cells. In both cell lines, we observed that CPDs mostly led to GC-AT transitions; whereas only nondimer photoproducts were responsible for the induction of GC-TA transversions in TTD and TTD + ERCC2 cells.