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酵母遺伝子産物Deg1の酵素活性は、破壊された酵母株と酵母と大腸菌で発現した複製された組換えタンパク質の両方を使用して同定されました。結果は、deg1減少した酵母株がtRNAでのシュードリジンpsi 38およびpsi 39の形成のためのシンターゼ活性を欠いていることを示していますが、他の活性は、位置13、27、28、32、34、35、36の位置でのPSI形成に特有のものです。55はTRNAで影響を受けていません。また、大腸菌で発現したHis6タグ付き組換え酵母Deg1pと、酵母のプロテインAとのタンパク質融合は、異なるtRNA基質におけるPSI 38およびPSI 39形成に対してのみ酵素活性を示します。したがって、deg1pは3番目のtRNA：酵母でこれまでに特徴付けられた3番目のtRNA：シュードウリジンシンターゼ（PUS3P）です。DEG1遺伝子の破壊は致命的ではありませんが、特に温度の上昇（37度C）で、酵母の成長率を大幅に減らします。免疫蛍光顕微鏡で示されるように、DEG1Pは核と細胞質の両方に局在します。deg1縮小された株から選択された自然に発生する細胞質およびミトコンドリアTRNAに存在する（または存在しない）シュードリジン残基の同定は、これら2つの細胞コンパートメントの両方でPSI 38-およびPSI 39合成活性の共通の起源を指摘しています。全体的な3次元TRNA構造およびTRNAのいくつかの個々の変異に対するPUS3P（DeG1P）活性の感度も研究されました。結果は、酵母Pus3pおよびその相同TRNA：大腸菌のTRNA：シュードリジンシンターゼTrua（最初はHISTまたはPSU-I遺伝子産物と呼ばれる）によるTRNA認識の微妙な違いの存在を示しています。
酵母遺伝子産物Deg1の酵素活性は、破壊された酵母株と酵母と大腸菌で発現した複製された組換えタンパク質の両方を使用して同定されました。結果は、deg1減少した酵母株がtRNAでのシュードリジンpsi 38およびpsi 39の形成のためのシンターゼ活性を欠いていることを示していますが、他の活性は、位置13、27、28、32、34、35、36の位置でのPSI形成に特有のものです。55はTRNAで影響を受けていません。また、大腸菌で発現したHis6タグ付き組換え酵母Deg1pと、酵母のプロテインAとのタンパク質融合は、異なるtRNA基質におけるPSI 38およびPSI 39形成に対してのみ酵素活性を示します。したがって、deg1pは3番目のtRNA：酵母でこれまでに特徴付けられた3番目のtRNA：シュードウリジンシンターゼ（PUS3P）です。DEG1遺伝子の破壊は致命的ではありませんが、特に温度の上昇（37度C）で、酵母の成長率を大幅に減らします。免疫蛍光顕微鏡で示されるように、DEG1Pは核と細胞質の両方に局在します。deg1縮小された株から選択された自然に発生する細胞質およびミトコンドリアTRNAに存在する（または存在しない）シュードリジン残基の同定は、これら2つの細胞コンパートメントの両方でPSI 38-およびPSI 39合成活性の共通の起源を指摘しています。全体的な3次元TRNA構造およびTRNAのいくつかの個々の変異に対するPUS3P（DeG1P）活性の感度も研究されました。結果は、酵母Pus3pおよびその相同TRNA：大腸菌のTRNA：シュードリジンシンターゼTrua（最初はHISTまたはPSU-I遺伝子産物と呼ばれる）によるTRNA認識の微妙な違いの存在を示しています。
The enzymatic activity of yeast gene product Deg1 was identified using both disrupted yeast strain and cloned recombinant protein expressed in yeast and in Escherichia coli. The results show that the DEG1-disrupted yeast strain lacks synthase activity for the formation of pseudouridines psi 38 and psi 39 in tRNA whereas the other activities, specific for psi formation at positions 13, 27, 28, 32, 34, 35, 36, and 55 in tRNA, remain unaffected. Also, the His6-tagged recombinant yeast Deg1p expressed in E. coli as well as a protein fusion with protein A in yeast display the enzymatic activity only toward psi 38 and psi 39 formation in different tRNA substrates. Therefore, Deg1p is the third tRNA:pseudouridine synthase (Pus3p) characterized so far in yeast. Disruption of the DEG1 gene is not lethal but reduces considerably the yeast growth rate, especially at an elevated temperature (37 degrees C). Deg1p localizes both in the nucleus and in the cytoplasm, as shown by immunofluorescence microscopy. Identification of the pseudouridine residues present (or absent) in selected naturally occurring cytoplasmic and mitochondrial tRNAs from DEG1-disrupted strain points out a common origin of psi 38- and psi 39-synthesizing activity in both of these two cellular compartments. The sensitivity of Pus3p (Deg1p) activity to overall three-dimensional tRNA architecture and to a few individual mutations in tRNA was also studied. The results indicate the existence of subtle differences in the tRNA recognition by yeast Pus3p and by its homologous tRNA:pseudouridine synthase truA from E. coli (initially called hisT or PSU-I gene product).
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