正常なヒト経口ケラチノサイトの複製老化は、テロメアを短縮せずにテロメラーゼ活性の喪失に関連しています

テロメラーゼ活性は、PCRベースのテロメアリアリエーションを使用して、1つの正常なヒト口腔角化細胞（NHOK）、1つの正常な口腔上皮組織標本、1つの不死化ヒト経口ケラチノサイト（HOK）細胞株、および10のヒト経口癌細胞株の7つの異なる培養培養で分析されました。増幅プロトコルアッセイを繰り返します。テロメラーゼ活性は、すべてのテストされた細胞および組織で発見されましたが、NHOKSおよび上皮組織の活性は他のテストされた細胞株の活性よりも低かった。NHOKSの継続的なサブカルチャーは、複製老化をもたらし、異なる集団倍増レベルのNHOK培養物の酵素活性を評価することにより、テロメラーゼ活性と複製老化の関連を調査しました。これらの細胞がミタス後の段階に到達するまで、3つの異なるNHOK培養が独立して培養されました。ヒト口腔に由来する線維芽細胞とは異なり、急速に増殖するNHOKで有意なテロメラーゼ活性が検出され、テロメラーゼ活性は老化の近くのケラチノサイトではほとんど検出できませんでした。ただし、テロメアDNAで構成される末端制限フラグメントは、サブカルチャーによるテロメアの短縮を検出可能な短縮なしで、NHOKの約6.0キロ塩基で絶えず維持されていることがわかりました。NHOKの細胞内P53およびP21WAF1/CIP1タンパク質レベルは、細胞の通過により徐々に大幅に減少しました。これらのデータは、活発に増殖するNHOKがテロメラーゼ活性を含み、NHOKの複製老化はテロメアを短縮せずにテロメラーゼ活性の喪失に関連していることを示しています。ただし、NHOKSの複製老化は、これらの細胞の野生型p53および/またはp21WAF1/CIP1タンパク質の蓄積に明らかに関連していないようです。

Telomerase activity was analyzed in 7 different cultures of secondary normal human oral keratinocytes (NHOKs), 1 normal human oral epithelial tissue specimen, 1 immortalized human oral keratinocyte (HOK) cell line, and 10 human oral cancer cell lines using the PCR-based telomeric repeat amplification protocol assay. Telomerase activity was found in all tested cells and tissue, but the activity in NHOKs and epithelial tissue was lower than that in other tested cell lines. Inasmuch as continued subculture of NHOKs results in replicative senescence, we investigated the association between telomerase activity and replicative senescence by evaluating the enzyme activity in NHOK cultures with different population doubling levels. Three different NHOK cultures were independently subcultured until these cells reached the postmitotic stage. Unlike in fibroblasts derived from the human oral cavity, significant telomerase activity was detected in rapidly proliferating NHOKs, and telomerase activity was barely detectable in the keratinocytes near and at senescence. However, the terminal restriction fragment consisting of telomeric DNA was found to be constantly maintained at approximately 6.0 kilobases in NHOKs without any detectable shortening of telomeres by subcultures. Intracellular p53 and p21WAF1/CIP1 protein levels in NHOKs were gradually and significantly diminished by the passage of cells. These data indicate that actively proliferating NHOKs contain telomerase activity and that replicative senescence of NHOKs is associated with the loss of telomerase activity without shortening of telomeres. However, replicative senescence of NHOKs is apparently not linked to an accumulation of wild-type p53 and/or p21WAF1/CIP1 proteins in these cells.