培養小脳顆粒細胞におけるGABA（a）受容体アルファ6サブユニットの発現は、GABA（a）受容体の活性化によって発達的に調節されています

7日齢のラットの小脳から調製され、4日または8日間培養された小脳顆粒細胞の原発性培養を使用して、GABA（A）受容体アゴニストの神経促進効果を研究しました。[5,4-c] alpha6 GABA（A）受容体サブユニットの発現に関するピリジン-3-オール（THIP）。これらの培養物から調製した膜を、イミダゾベンゾジアゼピン[3H] RO15-4513で光標識しました。in vitro（div）の4日間のThip処理培養では、膜におけるフォトラベル[3H] RO15-4513結合は、51キロダルトン、KDA（Alpha1サブユニット）と56-kDA（Alpha6サブユニット）放射性パイクの両方で有意に増加しました。ドデシル硫酸ナトリウム - ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）。対照的に、8 divのTHIP処理顆粒細胞は、51-kDaピークの[3H] RO15-4513の光補助において、コントロール培養から小さいが有意な減少を示しました。ただし、56 kDaポリペプチドで[3H] RO15-4513結合の有意な変化は観察されませんでした。顆粒細胞の銀濃度の免疫金染色を使用したalpha6サブユニットの免疫標識は、4 divではなく4 divでのみTHIP処理で有意な効果を示しました。光学顕微鏡による検査により、TIPの主な効果は、それぞれ15倍と6倍の顆粒細胞体と神経突起のアルファ6サブユニットクラスタリングを増加させることであることが示されました。in situハイブリダイゼーションを使用して、4 divでアルファ6 mRNAの小さなTIP誘発性の増加が検出されました。ただし、8 divでは影響はありませんでした。これらのデータは、THIPがAlpha6サブユニット発現に栄養効果があることを示唆しており、この効果は初期の発達段階でのみ発生します。さらに、この研究は、発達中の小脳におけるGABA（a）受容体サブユニットの発現を調節する際に、GABA（a）アゴニスト、したがって神経伝達物質GABAの役割に関するさらなる証拠を提示します。

Primary cultures of cerebellar granule cells, prepared from cerebella of 7-day-old rats and cultured for 4 or 8 days, were used to study the neurodifferentiative effect of a GABA(A) receptor agonist, 4,5,6,7-tetrahydroisoxazol[5,4-c]pyridin-3-ol (THIP), on the expression of the alpha6 GABA(A) receptor subunit. Membranes prepared from these cultures were photolabeled with the imidazobenzodiazepine [3H]Ro15-4513. In THIP-treated cultures at 4 days in vitro (DIV), photolabeled [3H]Ro15-4513 binding in membranes was significantly increased for both the 51 kilodalton, kDa, (alpha1 subunit) and 56-kDa (alpha6 subunit) radioactive peaks in sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). In contrast, THIP-treated granule cells at 8 DIV demonstrated a small but significant decrease from control cultures in the photoincorporation of [3H]Ro15-4513 in the 51-kDa peak; however, no significant change in [3H]Ro15-4513 binding was observed for the 56-kDa polypeptide. Immunolabeling of the alpha6 subunit using silver-enhanced, immuno-gold staining of granule cells showed a significant effect with THIP treatment only at 4 DIV and not at 8 DIV. Examination by light microscopy demonstrated that the major effect of THIP was to increase alpha6 subunit clustering on granule cell bodies as well as neurites, 15-fold and sixfold, respectively. Using in situ hybridization, a small THIP-induced increase in alpha6 mRNA was detected at 4 DIV; however, no effect was apparent at 8 DIV. These data suggest that THIP has a trophic effect on alpha6 subunit expression, and this effect occurs only at an early developmental stage. Moreover, this study presents further evidence for the role of GABA(A) agonists, and thus the neurotransmitter, GABA, in regulating the expression of GABA(A) receptor subunits in the developing cerebellum.