Maleimidocysteineamido-Dota誘導体：抗体スルフヒドリル基への放射線測定の結合のための新しい試薬は、pH依存性切断反応を受ける

大環状キレート酸塩1,4,7,10-テトラザシクロドデカン-N、N '、N "、N"テトラ酢酸（DOTA）の2つの二機能誘導体を合成しました。。水溶性カルボジイミド化学を使用して、DOTAをL-Cysteineに結合して、金属調整用の「ペンダント型」カルボキシル基とタンパク質付着のための直交チオール基の両方を組み込みました。その後、ホモバイケーション試薬1,6-ビス（マレイミド）ヘキサンを使用して、マクロサイクルへの硫化物結合を介してマレイミド機能を導入しました。また、硫化物群はスルホン側鎖に変換されました。両方のマレイミド誘導体は、ジチオスレイトールでmAbを光減少させた後、抗カルシノニック抗原キメラモノクローナル抗体CT84.66に結合しました。このようにして、抗体コンジュゲートを調製し、放射線111インチ（III）および90Y（III）、および定量的免疫反応性とほぼ定量的な標識を与えました。硫化物およびスルホン化合物で調製された放射免疫凝固液は、生理学的温度とpHでヒト血清および水溶液にインキュベートすると、比較的急速なリンカー依存性放射線損失を示しました。結合していないマレイミドサイスタイニド - ドータ誘導体とそのY（III）複合体は、37度Cの水溶液でインキュベートし、結果として得られた分解生成物をHPLCおよび質量分析により分析しました。これらの研究により、2つの二機能性キレート剤は、pH 5.4よりもpH 7.4でかなり速いリンカー特異的切断反応を受けたことが明らかになりました。化学的に不安定なリンカーシステムは、pH依存的にMABコンジュゲートからキレート化された放射線を放出すると予想されます。この特性は、多くの固形腫瘍が通常の組織よりも著しく酸性であるという観察に基づいて、これらの試薬とともに調製された放射性免疫凝固液の好ましい腫瘍摂取と正常な組織クリアランスを与える可能性があります。

We have synthesized two bifunctional derivatives of the macrocyclic chelating agent 1,4,7,10-tetraazacyclododecane-N,N',N",N"-tetraacetic acid (DOTA) equipped with maleimide groups for conjugation to reduced disulfide bonds of monoclonal antibodies. Using water-soluble carbodiimide chemistry, DOTA was coupled to L-cysteine to incorporate both a "pendant-type" carboxyl group for metal coordination and an orthogonal thiol group for protein attachment. The homobifunctional reagent 1,6-bis(maleimido)hexane was then used to introduce the maleimide functionality via a sulfide linkage to the macrocycle, and alternatively, the sulfide group was converted to a sulfone side chain. Both maleimide derivatives were conjugated to the anticarcinoembryonic antigen chimeric monoclonal antibody cT84.66 after light reduction of the mAb with dithiothreitol. In this manner, antibody conjugates were prepared which afforded near-quantitative labeling with the radiometals 111In(III) and 90Y(III) as well as quantitative immunoreactivity. Radioimmunoconjugates prepared with the sulfide and sulfone compounds exhibited relatively rapid linker-dependent radiometal loss when incubated in human serum and aqueous solutions at physiological temperature and pH. The unconjugated maleimidocysteineamido-DOTA derivatives and their Y(III) complexes were incubated in aqueous solution at 37 degrees C, and the resulting decomposition products were analyzed by HPLC and mass spectrometry. These studies revealed that the two bifunctional chelating agents underwent linker-specific cleavage reactions which were considerably faster at pH 7.4 than at pH 5.4. The chemically labile linker systems are expected to release chelated radiometal from mAb conjugates in a pH-dependent manner. This property may impart favorable tumor uptake and normal tissue clearance on radioimmunoconjugates prepared with these reagents, on the basis of the observation that many solid tumors are significantly more acidic than normal tissues.