L-セレクチン高部内皮静脈の認識に関連する炭水化物エピトープの複雑さと微分発現

リンパ球L-セレクチンの炭水化物リガンドは、末梢リンパ節および慢性炎症の部位の高部内皮静脈（HEV）で発現し、血液からこれらの組織へのリンパ球の動員を媒介します。マウスでは、末梢リンパ節アドレスチン（PNAD）と集合的に呼ばれるこれらのリガンドは、フコース、シアル酸、および硫酸塩を含み、グリカム-1、CD34、MADCAM-1を含むいくつかのHEV糖タンパク質を含むことが示されています。硫酸塩依存性エピトープを結合するモノクローナル抗体（MAB）MECA-79は、マウスとMANの両方でPNADを認識します。ヒトでは、MECA-79と反応する糖タンパク質種の間でCD34のみが同定されています。P-セレクチンは扁桃ヘブで高度に発現していますが、MECA-79と反応したり、L-セレクチンを介したリンパ球転がりをサポートすることは発見されていませんでした。ヒトPNADをさらに特徴付けるために、MABはヒト扁桃から免疫分離された精製されたpNADに対して開発されました。MABS JG-1、JG-5、JG-9、およびJG-10は、MECA-79と同様に、ヒトトンシルでHEVを結合し、ウエスタンブロットで同様に反応し、JG-9とJG-10は精製PNADでのリンパ球の転がりをブロックします。さらに、精製された扁桃PNADの競争力のあるELISAにより、すべてのmAbsは重複するエピトープと反応することがわかった。ただし、JG-1、JG-5、JG-9、およびJG-10はマウスPNADを認識しておらず、MECA-79とは異なり、ニューラミニダーゼに敏感な決定因子を認識しています。驚くべきことに、JG-1によって認識されたエピトープは、扁桃と末梢リンパ節には豊富ですが、これらのHEVはMECA-79反応性であるにもかかわらず、慢性炎症を起こした皮膚の一部のサンプルには付録HEVまたはHEVに存在しません。さらに、JG-5とJG-9は扁桃、末梢リンパ節、および炎症を起こした皮膚HEVとよく反応しますが、付録組織の時折内皮細胞とのみ反応します。これらの発見は、HEVによって発現され、L-セレクチンによって認識され、in vivoの異なる部位でそれらの微分表現を実証する炭水化物決定因子の有意な多様性を指摘しています。これらの抗体は、ヒトL-セレクチンリガンドの正確な構造を調査するのに役立つはずです。

Carbohydrate ligands for lymphocyte L-selectin are expressed on high endothelial venules (HEVs) in peripheral lymph nodes and sites of chronic inflammation and mediate the recruitment of lymphocytes from the blood into these tissues. In the mouse, these ligands, collectively termed the peripheral lymph node addressin (PNAd), have been shown to contain fucose, sialic acid, and sulfate and to include several HEV glycoproteins including GlyCAM-1, CD34, and MAdCAM-1. Monoclonal antibody (MAb) MECA-79, which binds a sulfate-dependent epitope, recognizes PNAd in both mouse and man. In humans, only CD34 has been identified among the glycoprotein species that react with MECA-79. Although P-selectin is highly expressed in tonsil HEVs, it was not found to react with MECA-79 or to support L-selectin-mediated lymphocyte rolling. To further characterize human PNAd, MAbs were developed against purified PNAd immunoisolated from human tonsil. MAbs JG-1, JG-5, JG-9, and JG-10, like MECA-79, bind HEVs in human tonsil and react similarly in Western blots, and JG-9 and JG-10 also block lymphocyte rolling on purified PNAd. In addition, by competitive ELISA on purified tonsil PNAd, all MAbs were found to react with overlapping epitopes. However, JG-1, JG-5, JG-9, and JG-10 do not recognize mouse PNAd, and unlike MECA-79, they recognize determinants that are sensitive to neuraminidase. Strikingly, the epitope recognized by JG-1, although abundant in tonsil and peripheral lymph node, is absent from appendix HEVs or HEVs in some samples of chronically inflamed skin, even though these HEVs are MECA-79 reactive. Moreover, although JG-5 and JG-9 react well with tonsil, peripheral lymph node, and inflamed skin HEVs, they react only with occasional endothelial cells in appendix tissues. These findings point to significant diversity in the carbohydrate determinants expressed by HEVs and recognized by L-selectin and demonstrate their differential representation in different sites in vivo. These antibodies should be useful in probing the precise structure of human L-selectin ligands.