高性能液体クロマトグラフィー - 大気圧力化学イオン化質量分析を使用したヒト血清中のレチノールとパルミチン酸レチノールとパルミチン酸レチニルの定量化方法の開発

ビタミンA化合物オールトランス - レチノールとオールトランスレチニルパルミチン酸の定量分析の方法は、高性能液体クロマトグラフィー - 大気炎症性化学イオン化質量分析（APCI-LC-MS）を使用して開発されました。ビタミンAの以前の定量的質量分析法とは異なり、GC分離の代わりにC30逆相カラムを使用してHPLC分離を実行しました。サンプルの加水分解または誘導体化は必要ないため、レチノールに加水分解されるのではなく、分析のためにパルミチン酸レチニルが保存されました。ヒト血清は、腐敗または追加の精製なしに単純なヘキサン抽出後に分析されました。APCIとエレクトロスプレーイオン化の比較により、APCIのみが4桁すべてのレチノールと3桁のパルミチン酸レチニル濃度にわたって線形応答を生成することが示されました。M/Z 269のフラグメントイオンの選択されたイオンモニタリングは、レチノールとパルミチン酸レチノールの両方のAPCI定量に使用されました。これは、塩基ピークであり、両方の化合物と内部標準、酢酸レチニルの質量スペクトルにおける唯一の豊富なイオンであったためです。M/Z 269のイオンは、水の損失、パルミチン酸の損失、またはそれぞれレチノール、パルミチン酸レチニル、酢酸レチニルのプロトン分子からの酢酸の除去に対応していました。全トランスレチノールおよびオールトランスレチニルパルミチン酸のAPCI-LC-MSの検出の限界は、約34 FMOL/マイクロリットルおよび36 FMOL/マイクロリットル（0.670 PMOL All-Trans-Retinolおよび0.720 PMOL All-であると判断されました。それぞれ列に20マイクロリットルに注入されたパルミチントランス - パルミチン酸トランス）。定量の限界は、それぞれレチノールとパルミチン酸レチニルの場合、それぞれ約500のFMOL/マイクロリットルと250 FMOL/マイクロリットル（10 pmolおよび5 pmolが列に20マイクロリットルに注入された）でした。

A method for the quantitative analysis of the vitamin A compounds all-trans-retinol and all-trans-retinyl palmitate was developed using high-performance liquid chromatography-atmospheric pressure chemical ionization-mass spectrometry (APCI-LC-MS). Unlike previous quantitative mass spectrometric methods for vitamin A, HPLC separations were carried out using a C30 reversed-phase column instead of GC separation. Because no sample hydrolysis or derivatization was necessary, retinyl palmitate was preserved for analysis instead of being hydrolyzed to retinol. Human serum was analyzed following simple hexane extraction without saponification or any additional purification. A comparison of APCI and electrospray ionization showed that only APCI produced a linear response over all four orders of magnitude of retinol and three orders of magnitude of retinyl palmitate concentrations. Selected ion monitoring of the fragment ion of m/z 269 was used for APCI quantitation of both retinol and retinyl palmitate, since it was the base peak and the only abundant ion in the mass spectra of both compounds and the internal standard, retinyl acetate. The ion of m/z 269 corresponded to loss of water, loss of palmitic acid, or elimination of acetic acid from the protonated molecules of retinol, retinyl palmitate and retinyl acetate, respectively. The limit of detection of APCI-LC-MS for all-trans-retinol and all-trans-retinyl palmitate was determined to be approximately 34 fmol/microliter and 36 fmol/microliter (0.670 pmol all-trans-retinol and 0.720 pmol all-trans-retinyl palmitate injected in 20 microliters on-column), respectively. The limit of quantitation was approximately 500 fmol/microliter and 250 fmol/microliter (10 pmol and 5 pmol injected in 20 microliters on-column) for retinol and retinyl palmitate, respectively.