犬とヒトの胆汁の主要なビリルビン共役であるビリルビン・ディグルクロニドの分離と特性評価

ビリルビンの主要な共役の化学構造は、構造分析によって明確に解明されました。共役ビリルビンは、最初にヒト十二指腸吸引剤または犬の胆嚢胆汁の脂質成分から分離され、次にT.L.C.によって解決されました。一連のテトラピロールに。次に、主要なテトラピロールを、さらなる分析のために、より安定したジピュロリックAZO誘導体に変換されました。アゾピッジメントの共役部分は、メトキシドナトリウムを使用したメタノリシス後に特徴付けられました。この反応は、水に溶けやすい2種類の製品と有機溶媒に溶ける2種類の製品を生成します。有機可溶性画分は、T.L.Cによって示されました。ビリルビンのジピルロール性アゾ誘導体のメチルエステルを含む質量分析。水溶性材料は、Enzymic Procedures、T.L.C.、N.M.R。によって分析されました。分光測定と組み合わせG.L.C.および質量分析。この分析により、メタノリシスに起因する唯一の水溶性生成物がグルクロン酸であることが示されました。この構造は、質量分析とN.M.R.の両方で、純粋な標準の構造と同一でした。分光法。汚染部分は見つかりませんでした。定量的測定により、グルクロン酸は、ビリルビンのジピルロール性アゾ誘導体のメチルエステルとともに1：1モル比で放出されたことが示されました。これにより、ビリルビンジグルクロニドが胆汁に存在する主要な色素として明確に確立されます。ビリルビン・ジグルクロニドの同定に関する過去の問題は、胆汁脂質による汚染により、共役ビリルビンのアゾピッジの不完全な分離と分離をもたらす手順に起因することが示されました。

The chemical structure of the major conjugate of bilirubin was unequivocally elucidated by structural analysis. The conjugated bilirubins were first separated from the lipid components of human duodenal aspirates or dog gall-bladder bile, and then resolved by t.l.c. into a series of tetrapyrroles. The major tetrapyrrole was then converted into its more stable dipyrrolic azo derivative for further analysis. The conjugated moiety of the azopigment was characterized after methanolysis with sodium methoxide. This reaction yields two types of product, those soluble in water and those soluble in organic solvents. The organic-soluble fraction was shown by t.l.c. and mass spectrometry to contain the methyl esters of the dipyrrolic azo derivatives of bilirubin. The water-soluble materials were analysed by enzymic procedures, t.l.c., n.m.r. spectrometry and combined g.l.c. and mass spectrometry. This analysis showed that the only water-soluble product resulting from the methanolysis was glucuronic acid. The structure was identical with that of pure standards, on both mass spectrometry and n.m.r. spectroscopy. No contaminating moieties were found. Quantitative measurement indicated that the glucuronic acid had been released in a 1:1 molar ratio with the resulting methyl esters of the dipyrrolic azo derivatives of bilirubin. This unequivocally establishes bilirubin diglucuronide as the major pigment present in bile. Past problems with identification of bilirubin diglucuronide were shown to originate from procedures which resulted in incomplete separation and isolation of the azopigments of the conjugated bilirubins, owing to contamination by biliary lipids.