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病原性大腸菌によって産生および分泌されるヘモリシン毒素は、RTX（毒素の繰り返し）毒素として知られる細胞溶解、構造的に相同タンパク質毒素のファミリーの1つです。RTX毒素は、遺伝子クラスターの産物であるCABDです。A遺伝子産物である非毒性ヘモリシン（Prohlya）は、2つの内部リジン残基の翻訳後脂肪アシル化によって毒性になります。C遺伝子産物であるHLYCはアシル化に不可欠であり、アシルアシルキャリアタンパク質（ACP）はアシルドナーです。HlybとHlydは毒素の分泌に関与しています。ProhlyaとHLYCは別々にサブクローニングされ、発現し、精製され、多様な放射性アシル基を含むアシルACPが合成されました。これらのタンパク質を使用して、アシル移動によるプロハリヤのフリヤへの変換がアッセイされました。アシルACPは、義務アシルドナーでした。アシル移動はHLYCモノマーによって触媒され、アシル酵素中間体が示されました。ACPSHによって反応は阻害されましたが、脂肪酸または脂肪アシルCOAによっては阻害されませんでした。HLYAのKMとVMAXは、それぞれ0.94ミクロムおよび7.5 pmolのアシル基を移動した/minでした。Myristoyl-ACPのkmおよびVmaxは0.48 microMおよび6.9 pmol/minでした。アシルグループの炭素鎖の長さが増加するにつれて、異なるアシルACPSの運動パラメーターは競合阻害に似ていました。KMは増加しましたが、VMAXは変更されませんでした。ACPSのアシルトランスフェラーゼ反応における異なる速度論的効率は、特に生成した対応するアシルトキシンの溶解能とは顕著に対照的でした。
病原性大腸菌によって産生および分泌されるヘモリシン毒素は、RTX（毒素の繰り返し）毒素として知られる細胞溶解、構造的に相同タンパク質毒素のファミリーの1つです。RTX毒素は、遺伝子クラスターの産物であるCABDです。A遺伝子産物である非毒性ヘモリシン（Prohlya）は、2つの内部リジン残基の翻訳後脂肪アシル化によって毒性になります。C遺伝子産物であるHLYCはアシル化に不可欠であり、アシルアシルキャリアタンパク質（ACP）はアシルドナーです。HlybとHlydは毒素の分泌に関与しています。ProhlyaとHLYCは別々にサブクローニングされ、発現し、精製され、多様な放射性アシル基を含むアシルACPが合成されました。これらのタンパク質を使用して、アシル移動によるプロハリヤのフリヤへの変換がアッセイされました。アシルACPは、義務アシルドナーでした。アシル移動はHLYCモノマーによって触媒され、アシル酵素中間体が示されました。ACPSHによって反応は阻害されましたが、脂肪酸または脂肪アシルCOAによっては阻害されませんでした。HLYAのKMとVMAXは、それぞれ0.94ミクロムおよび7.5 pmolのアシル基を移動した/minでした。Myristoyl-ACPのkmおよびVmaxは0.48 microMおよび6.9 pmol/minでした。アシルグループの炭素鎖の長さが増加するにつれて、異なるアシルACPSの運動パラメーターは競合阻害に似ていました。KMは増加しましたが、VMAXは変更されませんでした。ACPSのアシルトランスフェラーゼ反応における異なる速度論的効率は、特に生成した対応するアシルトキシンの溶解能とは顕著に対照的でした。
Hemolysin toxin produced and secreted by pathogenic Escherichia coli is one of a family of cytolytic, structurally homologous protein toxins known as RTX (repeats in toxin) toxins. RTX toxins are products of a gene cluster, CABD. The A gene product, nontoxic hemolysin (proHlyA), is made toxic by posttranslational fatty acylation of two internal lysine residues. HlyC, the C gene product, is essential for acylation, and acyl-acyl carrier protein (ACP) is the acyl donor. HlyB and HlyD are involved in secretion of the toxin. ProHlyA and HlyC were separately subcloned, expressed, and purified, and acyl-ACPs with diverse radioactive acyl groups were synthesized. With these proteins, the conversion of proHlyA to HlyA by acyl transfer was assayed. Acyl-ACP was the obligate acyl donor. Acyl transfer was catalyzed by HlyC monomer, and an acyl-enzyme intermediate was shown. Reaction was inhibited by ACPSH but not by fatty acid or fatty-acyl CoA. Km and Vmax for HlyA were 0.94 microM and 7.5 pmol of acyl group transferred/min, respectively; Km and Vmax for myristoyl-ACP were 0.48 microM and 6.9 pmol/min. The kinetic parameters of different acyl-ACPs resembled a competitive inhibition as acyl group carbon chain length increased; Km's increased while Vmax's remained unchanged. The different kinetic efficacies in the acyltransferase reaction of the ACPs with different acyl groups contrasted notably with the lytic powers of the corresponding acyl-toxins that they generated.
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