MCF-7細胞のその受容体へのウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子の結合は、細胞外運動性の増加に必要な細胞外シグナル調節キナーゼ1および2を活性化します。

ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（UPA）の受容体への結合、UPAR、細胞の接着、移動、および腫瘍細胞の浸潤を調節します。これらの活性の一部は、この受容体がグリコシルホスファチジルイノシトールアンカーによってのみ原形質膜にリンクされているにもかかわらず、Signal Transpranductionを開始するUPARの能力を反映している可能性があります。この研究では、単鎖UPAがMCF-7乳癌細胞で細胞外シグナル調節キナーゼ1（ERK1）およびERK2を活性化することを実証しました。ERK1とERK2のリン酸化は、UPAを追加してから1分後に増加し、5分ずつベースラインレベルに戻しました。UPAのアミノ末端フラグメント（ATF）は、UPARに結合しますが、プロテイナーゼ活性を欠いており、ERK1とERK2も活性化しました。UPAおよびATFへの応答は、マイトジェン活性化プロテインキナーゼキナーゼの阻害剤であるPD098059で細胞を前処理したときに排除されました。UPAとATFは、in vitroで血清コーティングされたトランスウェル膜を横切るMCF-7細胞の移動を促進しました。上部チャンバーにUPAを加えたときに2.1 +/- 0.4倍、4。UPAが下部チャンバーに加えられたときに8 +/- 0.8倍、UPAを追加すると7.7 +/- 1.0倍増加しました。両方のチャンバー。Pulseに露出したMCF-7細胞は、30分間UPAに露出し、洗浄して非結合リガンドを除去し、24時間移動が許可されたにもかかわらず、運動性の増加を示しました。PD098059は、UPAが運動性アッセイ全体に存在するか、パルス曝露によって投与されたかどうかに関係なく、MCF-7細胞の運動性に対するUPAの影響を完全に中和しました。これらの結果は、UPA刺激された乳癌細胞の移動に必要な新規の受容体依存性シグナル伝達活性を示しています。

Binding of urokinase-type plasminogen activator (uPA) to its receptor, uPAR, regulates cellular adhesion, migration, and tumor cell invasion. Some of these activities may reflect the ability of uPAR to initiate signal transduction even though this receptor is linked to the plasma membrane only by a glycosylphosphatidylinositol anchor. In this study, we demonstrated that single-chain uPA activates extracellular signal-regulated kinase 1 (ERK1) and ERK2 in MCF-7 breast cancer cells. Phosphorylation of ERK1 and ERK2 was increased 1 min after adding uPA and returned to baseline levels by 5 min. The amino-terminal fragment (ATF) of uPA, which binds to uPAR but lacks proteinase activity, also activated ERK1 and ERK2. Responses to uPA and ATF were eliminated when the cells were pretreated with PD098059, an inhibitor of mitogen-activated protein kinase kinase. uPA and ATF promoted the migration of MCF-7 cells across serum-coated Transwell membranes in vitro. Migration was increased 2.1 +/- 0.4-fold when uPA was added to the top chamber, 4. 8 +/- 0.8-fold when uPA was added to the bottom chamber, and 7.7 +/- 1.0-fold when uPA was added to both chambers. MCF-7 cells that were pulse-exposed to uPA for 30 min, and then washed to remove unbound ligand, demonstrated increased motility even though migration was allowed to occur for 24 h. PD098059 completely neutralized the effects of uPA on MCF-7 cellular motility, irrespective of whether the uPA was present for the entire motility assay or administered by pulse-exposure. These results demonstrate a novel, receptor-dependent signaling activity which is required for uPA-stimulated breast cancer cell migration.