P130CASのチロシンリン酸化は、破骨細胞のアクチン組織に関与しています

インテグリンを介した細胞外マトリックスとの相互作用は、骨形成細胞である破骨細胞の機能に重要な役割を果たします。この研究では、破骨細胞におけるアクチン組織におけるP130CAS（CRK関連基質（CAS））の役割を調べます。多核破骨細胞様細胞（OCL）は、マウス骨髄細胞と原発性骨芽細胞の共培養で得られました。培養皿をめっきした後、OCLSは細胞周辺（アクチン環）のF-アクチンドットで構成されるリングのような構造を形成しました。アクチンリングを伴うOCLの割合とその直径は、時間と細胞の広がりとともに増加しました。タンパク質のチロシンリン酸化（p130）は、アクチン環形成とともに増加しました。シトカラシンDによる治療は、アクチンリングを破壊し、p130のチロシンリン酸化を減少させました。特定の抗体を使用して、p130がCASとして識別されました。免疫細胞化学により、CASはOCLSの末梢領域に局在し、その分布はF-アクチンの分布を重ねました。破骨細胞活性が著しく損なわれるSRC（ - / - ）マウスに由来するOCLSでは、CASのチロシンリン酸化が著しく減少しました。さらに、CASは細胞質に拡散的に分布しており、アクチン環の形成は観察されません。これらの発見は、CASのSRC依存性チロシンリン酸化が、破骨細胞の活性化に関連する接着誘発性アクチン組織に関与していることを示唆しています。

Integrin-mediated interaction with the extracellular matrix plays a critical role in the function of osteoclasts, the bone-resorbing cells. This study examines the role of p130Cas (Crk-associated substrate (Cas)) in actin organization in osteoclasts. Multinucleated osteoclast-like cells (OCLs) were obtained in a co-culture of murine bone marrow cells and primary osteoblasts. After plating on culture dishes, OCLs formed a ringlike structure consisting of F-actin dots at cell periphery (actin ring). The percentage of OCLs with actin rings and its diameter increased with time and cell spreading. Tyrosine phosphorylation of a protein (p130) increased with actin ring formation. Treatment with cytochalasin D disrupted actin rings and reduced tyrosine phosphorylation of p130. Using specific antibodies, p130 was identified as Cas. By immunocytochemistry, Cas was localized to the peripheral regions of OCLs and its distribution overlapped that of F-actin. In OCLs derived from Src(-/-) mice, in which osteoclast activity is severely compromised, tyrosine phosphorylation of Cas was markedly reduced. Moreover, Cas was diffusely distributed in the cytoplasm and actin ring formation is not observed. These findings suggest that Src-dependent tyrosine phosphorylation of Cas is involved in the adhesion-induced actin organization associated with osteoclast activation.