非中和抗体遺伝子をトランスフェクトした細胞は、HIV感染に耐性がある：小胞体およびトランスゴルジ体ネットワークを標的とする

単一鎖FV（SCFV）を含むプラスミドは、小胞体（ER）またはトランスゴルジネットワーク（TGN）保持信号を伴う有無にかかわらず、ヒト抗HIV-1 GP41 AB cDNAを非中立化しました。これらのSCFVを発現する安定したトランスフェクタントは、COS-7細胞とHIV-1感受性CD4+ヒトT細胞（JURKAT）から生成されました。保持信号のないSCFVは細胞から分泌されましたが、ERまたはTGN保持信号を持つSCFVは、主に標的型の細胞内コンパートメント内にとどまりました。SCFV、SCFV-ER、およびSCFV-TGNの発現は、成長率またはCD4発現で測定されるように、感染していない細胞の出現に悪影響を与えませんでした。パルスチェースの実験により、細胞内のSCFV-ERおよびSCFV-TGNのT（1/2）がそれぞれ24時間を超え、9時間未満であることが明らかになりました。SCFV-ERおよびSCFV-TGN結合HIV GP160、およびSCFV-ER-GP160およびSCFV-TGN-GP160複合体は、HIV感染トランスフェクト剤内で安定していました。さらなる研究により、GP160のGP120およびGP41への成熟処理がSCFV-ERトランスフェクト因子でブロックされているが、SCFV-TGNトランスフェクト剤ではブロックされていないことが明らかになりました。さらに、P24で測定したHIV複製は、SCFV-ERまたはSCFV-TGNをトランスフェクトした細胞で最大99％阻害されましたが、SCFVの分泌型をトランスフェクトした細胞では阻害されませんでした。特定の細胞内コンパートメントへの非中立化抗HIV-1 ABSの標的化は、HIV複製をブロックし、HIV-1感染患者から感染していないリンパ陽性幹細胞を保護するための潜在的な治療戦略を表していると結論付けられています。

Plasmids containing single chain Fv (scFv) non-neutralizing human anti-HIV-1 gp41 Ab cDNA, with or without endoplasmic reticulum (ER) or trans-Golgi network (TGN) retention signals, were constructed. Stable transfectants expressing these scFvs then were generated from COS-7 cells and HIV-1-susceptible CD4+ human T cells (Jurkat). scFv without a retention signal was secreted from cells, whereas scFv with an ER or TGN retention signal remained primarily within targeted intracellular compartments. The expression of scFv, scFv-ER, and scFv-TGN did not adversely affect the appearance of uninfected cells, as measured by growth rate or CD4 expression. Pulse-chase experiments revealed that the t(1/2) of scFv-ER and scFv-TGN within cells was greater than 24 h and less than 9 h, respectively. The scFv-ER and scFv-TGN bound HIV gp160, and the scFv-ER-gp160 and the scFv-TGN-gp160 complexes were stable within HIV-infected transfectants. Further studies revealed that the maturation processing of gp160 into gp120 and gp41 was blocked in the scFv-ER transfectants, but not in the scFv-TGN transfectants. Moreover, HIV replication, as measured by p24, was inhibited by up to 99% in cells transfected with scFv-ER or scFv-TGN, but was not inhibited in cells transfected with the secretory form of scFv. It is concluded that the targeting of non-neutralizing anti-HIV-1 Abs to specific intracellular compartments blocks HIV replication and represents a potential therapeutic strategy for protecting uninfected lymphopoietic stem cells from HIV-1-infected patients.