RNAポリメラーゼIIによる転写開始におけるレート制限ステップへのTATAボックスシーケンスの寄与II

アデノウイルスの主要な後期プロモーターのコンテキストで異なるTATAシーケンスを含むプロモーターのコレクションを研究することにより、in vitroでの転写開始頻度を決定する際のTATAボックスの役割を調べました。転写速度の測定に加えて、配列の変化が関連性と解離の速度論とTBP結合の親和性にどのように影響するかを決定しました。最高のアフィニティタタボックスを含むプロモーターからの転写は、TBPがプロモーターと関連する速度によって制限されることが観察されました。対照的に、より低い親和性TATAボックスを含むプロモーターからの転写は、TBPがどの程度バインドされているかと、前発明の複雑なアセンブリでその後のステップを経る可能性のある立体構造の占有率の比較的低い占有率の両方によって制限されているように見えます。これらの結果の意味は、転写活性化因子による転写強化のメカニズムを理解します。

We have examined the role of the TATA box in determining transcription initiation frequency in vitro by studying a collection of promoters containing different TATA sequences in the context of the adenovirus major late promoter. In addition to measuring transcription rates, we have determined how the sequence changes affected the association and dissociation kinetics and the affinity of TBP binding. We observed that transcription from promoters containing the highest affinity TATA boxes is limited by the rate with which TBP associates with the promoter. In contrast, transcription from promoters containing lower affinity TATA boxes appears to be limited both by how much TBP is bound and by the relatively low occupancy of the conformation that can undergo subsequent steps in preinitiation complex assembly. The implications of these results in understanding the mechanism of transcription enhancement by transcriptional activators is discussed.