ASN-X-SER/THR SECONに続くアミノ酸は、N結合コアグリコシル化効率の重要な決定因子です

多くの真核生物タンパク質は、ASN結合（N結合）グリコシル化によって修飾されています。酵素オリゴサシアリルトランスフェラーゼによってタンパク質に添加されたオリゴ糖の数と位置は、その発現と機能に影響を与える可能性があります。n結合グリコシル化は通常、Xが等しいProではないASN-X-SER/THR SequonsのASN残基で発生します。ただし、多くのASN-X-SER/THRシーケンはグリコシル化されていないか、グリコシル化されていません。タンパク質中の1つまたは複数のASN-X-SER/THR Sequonsでの非効率的なグリコシル化は、不均一な糖タンパク質産物の産生をもたらします。これらのグリコフォームは、発現、安定性、抗原性、または機能のレベルが互いに異なる場合があります。個々のASN残基でのN結合グリコシル化の効率を制御する信号は完全に定義されていません。このレポートでは、部位指向の突然変異誘発アプローチを使用して、シーコン（Y位置、ASN-X-SER/THR-Y）に続く位置でのアミノ酸の影響を調査します。ASN37に単一のASN-X-SER/THR SECONを含む狂犬病ウイルス糖タンパク質のバリアントが生成されました。バリアントは、20の一般的なアミノ酸のそれぞれでY位置に設計され、SerまたはThrのいずれかがヒドロキシ（Ser/Thr）位置にあります。各バリアントのコアグリコシル化効率は、無細胞翻訳/グリコシル化システムを使用して定量化されました。これらの研究は、Y位置のアミノ酸がコアグリコシル化効率の重要な決定因子であることを明らかにしています。

Many eukaryotic proteins are modified by Asn-linked (N-linked) glycosylation. The number and position of oligosaccharides added to a protein by the enzyme oligosaccharyltransferase can influence its expression and function. N-Linked glycosylation usually occurs at Asn residues in Asn-X-Ser/Thr sequons where X not equal Pro. However, many Asn-X-Ser/Thr sequons are not glycosylated or are glycosylated inefficiently. Inefficient glycosylation at one or more Asn-X-Ser/Thr sequons in a protein results in the production of heterogeneous glycoprotein products. These glycoforms may differ from one another in their level of expression, stability, antigenicity, or function. The signals which control the efficiency of N-linked glycosylation at individual Asn residues have not been fully defined. In this report, we use a site-directed mutagenesis approach to investigate the influence of the amino acid at the position following a sequon (the Y position, Asn-X-Ser/Thr-Y). Variants of rabies virus glycoprotein containing a single Asn-X-Ser/Thr sequon at Asn37 were generated. Variants were designed with each of the twenty common amino acids at the Y position, with either Ser or Thr at the hydroxy (Ser/Thr) position. The core glycosylation efficiency of each variant was quantified using a cell-free translation/glycosylation system. These studies reveal that the amino acid at the Y position is an important determinant of core glycosylation efficiency.