リステリアモノサイトゲネルEGDの自己分解アミダゼの分子特性

102 kDaオートリシンをコードする遺伝子は、直接スクリーニングプロトコルを使用して、リステリアモノサイトエゲンEGDゲノムDNAの発現ライブラリからクローン化されています。コード化されたタンパク質には2つのドメインがあります。N末端酵素ドメインは、黄色ブドウ球菌の主要オートライシン（ATL）のアミダゼドメインとの高いレベルの相同性を示し、4つの不完全を含むC末端、推定細胞壁結合ドメイン直接繰り返し。酵素の役割を調べるために、オートリシンをコードする遺伝子は、温度感受性プラスミドの部位特異的統合によって挿入されていません。酵素は、L。monocytogenesの壁が基質として使用されている場合、総溶類酵素活性の66％を占め、野生型と比較した場合、いくつかの主要な自己分解バンドがレンガーゲルで欠落しています。酵素は細胞分離に直接関与しているようには見えませんが、運動性に役割を果たします。大腸菌で発現した組換え酵素の特性評価は、それがアミダゼであり、さまざまなペプチドグリカン基質を加水分解できることを明らかにしました。

The gene encoding a 102 kDa autolysin has been cloned from an expression library of Listeria monocytogenes EGD genomic DNA, using a direct screening protocol. The encoded protein has two domains, an N-terminal enzymic domain showing a high level of homology to the amidase domain of the major autolysin (atl) of Staphylococcus aureus, and a C-terminal, putative cell-wall-binding domain containing four imperfect direct repeats. In order to examine the role of the enzyme, the autolysin-encoding gene was insertionally inactivated by site-specific integration of a temperature sensitive plasmid. The enzyme accounts for 66% of the total lytic enzyme activity when L. monocytogenes walls are used as substrate and several of the major autolytic bands are missing on renaturing gels when compared to the wild-type. The enzyme does not appear to be directly involved in cell separation but has a role in motility. Characterization of the recombinant enzyme expressed in Escherichia coli has revealed it to be an amidase and to be able to hydrolyse a range of peptidoglycan substrates.