培養中の細胞における遊離および総コレステロールのピコモール測定

培養中の細胞における遊離および総コレステロールの測定のための酵素的、蛍光測定法が提示されています。この方法は単純で、すべての酵素と2番目の試薬を含む1つの試薬が必要であり、pHを増加させ、製品の蛍光を強化します。この方法は、コレステロールを遊離するコレステリルエステルの酵素加水分解、コレステロールの過酸化水素の酸化、およびこの過酸化物のフルオロゲンとの反応に基づいて、ペルオキシダーゼの存在下でフルオレセンツ生成物を形成します。それは急速です。なぜなら、無料のコレステロールは5分で読み、20分後に総コレステロールを読むことができるからです。この方法の精度は、ガス液体クロマトグラフィーから得られた精度よりも大きい。

An enzymatic, fluorometric method for the determination of free and total cholesterol in cells in culture is presented. The method is simple, requiring one reagent that includes all of the enzymes and a second reagent that increases the pH, which enhances the fluorescence of the product. The method is based on the enzymatic hydrolysis of cholesteryl esters to free cholesterol, the oxidation of cholesterol with the liberation of hydrogen peroxide, and the reaction of this peroxide with a fluorogen to form a fluoresencet product in the presence of a peroxidase. It is rapid, in that free cholesterol can be read in 5 minutes and total cholesterol after 20 minutes. The precision of the method is greater than that obtained from gas-liquid chromatography.