脂質およびアデノウイルスを介した遺伝子移動エイズカポシの肉腫細胞株へ

カポシ肉腫（KS）は、HIV陽性の個人で発生する最も頻繁な悪性腫瘍です。AIDS-KSは、古典的な形態よりも攻撃的な病気であり、多くの深刻な合併症を伴う迅速な臨床経過を頻繁に行うことがよくあります。化学療法や生物学的修飾子の投与などのKSの現在の全身治療は、腫瘍の薬物耐性と試薬の用量制限毒性の両方によって複雑になります。多くのKS病変の相対的なアクセシビリティにより、この疾患はin vivo遺伝子治療プロトコルの特に魅力的な候補になります。この点で、AIDS-KS細胞で標的を絞った細胞死を選択的に達成するために、条件付き毒性の自殺および/または抗血管新生ベクターを提供することに関心があります。この目的のために、カチオン性脂質およびアデノウイルスを介したDNAトランスフェクション方法の両方を調べました。ホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子を使用して、脂質製剤、脂質とDNAの量、脂質/DNA比、細胞濃度など、脂質媒介DNAトランスフェクションで重要であることが知られている多数の変数を最適化しました。最適なトランスフェクション条件下では、KS細胞の約5〜25％が導入されたDNA配列を発現しました。アデノウイルスを介したDNA送達は、5つの一次KS細胞株のうち4つの脂質送達よりも効率的でした。2つの系統（RW248およびRW376）は、100％に近づく周波数でアデノウイルスによって導入されました。2つの細胞株（CVU-1およびRW80）は20〜35％の効率を示しました。2つの不死化KS細胞株（KS Y-1およびKS SLK）は不十分に感染し、5％未満の形質導入効率が得られました。これらの発見は、AIDS-KS細胞への遺伝子移動が実現可能であることを示しており、ベクター戦略が疾患の遺伝子治療アプローチを翻訳するのに寛容である可能性があることを示唆しています。

Kaposi's sarcoma (KS) is the most frequent malignancy occurring in HIV-positive individuals. AIDS-KS is a more aggressive disease than the classical form, frequently having a rapid clinical course with numerous serious complications. Current systemic treatments for KS, such as chemotherapy and the administration of biological modifiers, are complicated by both the drug resistance of the tumor and the dose-limiting toxicity of the reagents. The relative accessibility of many KS lesions makes the disease a particularly attractive candidate for in vivo gene therapy protocols. In this regard, we are interested in delivering conditionally toxic suicide and/or antiangiogenic vectors to accomplish targeted cell death selectively in AIDS-KS cells. To this end, we examined both cationic lipid- and adenoviral-mediated DNA transfection methods. Using the firefly luciferase reporter gene, we optimized numerous variables known to be important in lipid-mediated DNA transfection, including lipid formulation, the amount of lipid and DNA, lipid/DNA ratio, and cell concentration. Under optimal transfection conditions, approximately 5-25% of KS cells expressed the introduced DNA sequences. Adenoviral-mediated DNA delivery was more efficient than lipid delivery in 4 of 5 primary KS cell lines. Two of the lines (RW248 and RW376) were transduced by adenovirus at frequencies approaching 100%; two cell lines (CVU-1 and RW80) gave efficiencies of 20-35%. Two immortalized KS cell lines (KS Y-1 and KS SLK) were poorly infected, giving a transduction efficiency of <5%. These findings demonstrate that gene transfer into AIDS-KS cells is feasible, and suggest that vector strategies may be permissive for translating gene therapy approaches for the disease.