キメラ制限酵素：Foki切断ドメインへのGAL4融合

酵母タンパク質であるGal4は、ガラクトースとメリビオースの代謝に必要な遺伝子の転写を活性化します。ダイマーとして、コンセンサスパリンドローム17ベースペアDNA配列に結合します。これは、核酸と特異的に相互作用する亜鉛を介したペプチドループを含むタンパク質の第3フ​​ァミリーのメンバーです。GAL4には、非常に特徴的な亜鉛調整プロファイルとDNA結合モードがあります。ここでは、GAL4のN末端147アミノ酸をFokiエンドヌクレアーゼの切断ドメインにリンクすることにより、新しい部位特異的エンドヌクレアーゼの作成を報告します。融合タンパク質は活性であり、最適な条件下では、17 bpコンセンサスDNA部位に結合し、このサイトの近くで切断します。予想どおり、切断はコンセンサス拘束サイトの両側で発生します。

Gal4, a yeast protein, activates transcription of genes required for metabolism of galactose and melibiose. It binds as a dimer to a consensus palindromic 17-base pair DNA sequence. It is a member of the third family of proteins that contain zinc-mediated peptide loops that interact specifically with nucleic acids. Gal4 has a very distinctive zinc coordination profile and mode of DNA-binding. Here, we report the creation of a novel site-specific endonuclease by linking the N-terminal 147 amino acids of Gal4 to the cleavage domain of FokI endonuclease. The fusion protein is active and under optimal conditions, binds to a 17 bp consensus DNA site and cleaves near this site. As expected, the cleavage occurs on either side of the consensus binding site(s).