エンドセリンサブタイプA受容体は、シグナル伝達の非存在下でアゴニストおよび拮抗薬を介した内在化を受けます

強力な血管収縮因子および平滑筋細胞から平滑筋細胞であるエンドセリン-1（ET-1）は、主にGQ-ホスホリパーゼCシグナル伝達経路と結合される2つの異なるGタンパク質共役受容体、サブタイプA（ETAR）およびサブタイプBを介して作用します。。ET-1結合へのET-1結合は内在化を促進し、結合リガンドの少なくとも一部をその後分解することが知られています。エンドサイトーシスにシグナル伝達が必要かどうかを調査するために、野生型ETARと受容体キメラ（ETARC）を発現するヒト胚性腎臓293細胞の安定してトランスフェクトされた系統を発達させました。、もう1つのGタンパク質共役受容体ですが、GS-Adenylylシクラーゼ経路を介してシグナルを通知するもの。ETARCはET-1のようにET-1を結合しますが、シグナル伝達が不足しています。結合したコンカナバリンA/スクロース勾配遠心分離技術を使用して、原形質膜を他の細胞膜から分離すると、[125i] ET-1が37 CのETAR発現細胞に急速に内在化されていることがわかりました（内在化のためにT1/2 = 5分;エンドサイコン速度定数= 0.1分（-1）; ETARC発現細胞は、野生型受容体よりもやや遅い速度であるが、内在化速度= 15分、エンドサイトーシス速度定数= 0.03分（-1）免疫蛍光共焦点顕微鏡を使用して、eTARのN末端領域に対して発生し、さらに類似した結果が得られました。これらの結果を発現する細胞では、イノシトール1,4,5-三リン酸シグナルは、リガンドを介したETARの内在化に必要であり、さらに、BQ123が新規であることを示唆しています。臨床使用において潜在的に重要な意味があります。

The potent vasoconstrictor and mitogen to smooth muscle cells, endothelin-1 (ET-1), acts via two distinct G protein-coupled receptors, subtype A (ETAR) and subtype B, that are coupled primarily to the Gq-phospholipase C signaling pathway. It is known that ET-1 binding to ETAR promotes internalization, with subsequent degradation of at least a portion of the bound ligand. To investigate whether signaling is required for endocytosis, we developed stably transfected lines of human embryonic kidney 293 cells expressing wild-type ETAR and a receptor chimera (ETARC) in which the C-terminal cytoplasmic tail to ETAR was replaced with that of the lutropin receptor, another G protein-coupled receptor, but one which signals through the Gs-adenylyl cyclase pathway. ETARC binds ET-1 like ETAR, but is deficient in signaling. Using a combined concanavalin A/sucrose gradient centrifugation technique to separate plasma membranes from other cellular membranes, we found that [125I]ET-1 is rapidly internalized into ETAR-expressing cells at 37 C (t1/2 for internalization = 5 min; endocytic rate constant = 0.1 min(-1); ETARC-expressing cells also internalize [125I]ET-1, albeit at a somewhat slower rate than wild-type receptor (t1/2 for internalization = 15 min; endocytic rate constant = 0.03 min(-1). Using immunofluorescence confocal microscopy and an antibody developed to the N-terminal region of ETAR, qualitatively similar results were obtained. In addition, it was found using confocal microscopy that the ETAR-selective antagonist, BQ123, also promoted rapid internalization in cells expressing ETAR. These results establish that inositol 1,4,5-trisphosphate signaling is not required for ligand-mediated internalization of ETAR and suggest that a receptor conformational change is necessary. Moreover, the finding that BQ123 promotes ETAR internalization is novel and has potentially important implications in its clinical use.