u8 snornaの核小体局在要素は、rRNA処理に必要な配列とは異なります

U8核小体RNA（snorna）は、核小体の後生動物リボソームRNA（RRNA）プロセシングに不可欠です。その核小体局在に必要なアフェヌパスU8スノルナの配列と構造的特徴を分析しました。フルオレセイン標識U8 Snornaをアフリカアフリカ球卵母細胞核に注入し、核小体補体の蛍光顕微鏡検査により、核小体に局在する野生型Xenopus U8 Snornaが、注入されたU8 Snornaの5 'キャップの存在または性質に関係なく、核小体に局在することが明らかになりました。rRNA処理においてU8 snorna関数にとって重要であるU8の5 '部分のループまたは茎が変異した場合、核小体局在が観察されました。したがって、U8 snornaの相互作用の部位は、それを潜在的に前rnaにつなぐ可能性があり、U8の核小体局在に不可欠ではありません。ボックスCおよびDは、U8 SnornaおよびBox C/Dファミリーの他のSnornaの核小体局在要素（NOLE）であることが知られています。ただし、ここでは、それらを分離する2つのステムのシーケンスの削除によって示されているように、ボックスCとボックスDの空間関係はU8核小体局在には重要ではありませんでした。これらのU8変異体は、核小体に局在し、rRNA処理でも機能することができます。進化的に保存されたボックスCに隣接するU8の一本鎖カップ領域は、ボックスCおよびD.カップに加えてノールとして機能し、U8 snornaに固有のものであり、核小体局在に必要な推定タンパク質の結合に役立つ可能性があります。あるいは、カップは核小体内でu8 snornaを保持するのに役立つ場合があります。

U8 small nucleolar RNA (snoRNA) is essential for metazoan ribosomal RNA (rRNA) processing in nucleoli. The sequences and structural features in Xenopus U8 snoRNA that are required for its nucleolar localization were analyzed. Fluorescein-labeled U8 snoRNA was injected into Xenopus oocyte nuclei, and fluorescence microscopy of nucleolar preparations revealed that wild-type Xenopus U8 snoRNA localized to nucleoli, regardless of the presence or nature of the 5' cap on the injected U8 snoRNA. Nucleolar localization was observed when loops or stems in the 5' portion of U8 that are critical for U8 snoRNA function in rRNA processing were mutated. Therefore, sites of interaction in U8 snoRNA that potentially tether it to pre-rRNA are not essential for nucleolar localization of U8. Boxes C and D are known to be nucleolar localization elements (NoLEs) for U8 snoRNA and other snoRNAs of the Box C/D family. However, the spatial relationship of Box C to Box D was not crucial for U8 nucleolar localization, as demonstrated here by deletion of sequences in the two stems that separate them. These U8 mutants can localize to nucleoli and function in rRNA processing as well. The single-stranded Cup region in U8, adjacent to evolutionarily conserved Box C, functions as a NoLE in addition to Boxes C and D. Cup is unique to U8 snoRNA and may help bind putative protein(s) needed for nucleolar localization. Alternatively, Cup may help to retain U8 snoRNA within the nucleolus.