マウスモノクローナル抗体をマウス組織切片に塗布するための新しいブロッキング方法

テスト組織と同じ種の一次抗体による抗原検出は、間接免疫組織化学検出方法を使用する場合、高レベルのバックグラウンド染色により複雑になります。これは、最も広く使用されている実験モデルシステムであるマウスの組織でのマウスモノクローナル抗体の使用を厳しく制限します。これをブロックする方法は完全に満足のいく方法ではありません。ここでは、このシステムで遭遇するバックグラウンド染色は、主にFCとFABの両方を介した二次抗体の結合から、内因性免疫グロブリンおよびその他の組織成分に起因することを示しています。単純で効率的なブロッキング戦略が確立され、同じIgのFCフラグメントで濃縮された非標識二次抗マウスIgのパパインが消化した全体の断片を使用しました。この方法を使用して、低レベルで発現する抗原であるジストロフィンを視覚化し、免疫ペルオキシダーゼと免疫蛍光法の両方によってMDXマウスの復帰繊維を視覚化しました。ビオチン化抗マウスF（ab '）2を使用したビオチン - ストレプトアビジン免疫組織化学検出プロトコルの使用と組み合わせて、このシステムの重い背景を排除し、特定の抗原を明確に実証する強力なシグナル増幅を達成しました。1つのマウス抗体と別の種の1つの抗体による二重標識を、シグナル干渉なしに実施しました。この原理は、相同組織上の他の種の抗体や、おそらく異種抗体で高い背景が見つかる場所など、より広い用途に適合させることができます。（J Histochem Cytochem 46：977-983、1998）

Antigen detection with primary antibody of the same species as the test tissue is complicated by high levels of background staining when indirect immunohistochemical detection methods are used. This severely limits the use of murine monoclonal antibodies on tissues of the mouse, the most widely used experimental model system; no method for blocking this is fully satisfactory. Here we show that background staining encountered in this system results largely from the binding of secondary antibodies via both Fc and Fab to endogenous immunoglobulins and other tissue components. A simple and efficient blocking strategy was established, employing papain-digested whole fragments of unlabeled secondary anti-mouse Igs enriched with Fc fragment of the same Igs. We have used this method to visualize dystrophin, an antigen expressed at low level, in revertant fibers of mdx mouse by both immunoperoxidase and immunofluorescence methods. In combination with the use of a biotin-streptavidin immunohistochemical detection protocol with biotinylated anti-mouse F(ab')2 as second layer, we eliminated the heavy background in this system and achieved strong signal amplification to demonstrate the specific antigen clearly. Double labeling with one mouse antibody and one antibody from another species was performed without signal interference. This principle can be adapted for wider applications, such as antibodies of other species on homologous tissues and perhaps where high background is found with heterologous antibodies. (J Histochem Cytochem 46:977-983, 1998)