シュウ酸カルシウムとリン酸カルシウム結晶から抽出されたタンパク質の同定健康と石形成の被験者の尿中に誘導されるリン酸カルシウム結晶

私たちの研究の目的は、タンパク質を特定し、シュウ酸カルシウム（Caox）とリン酸カルシウム（CAP）結晶のマトリックスのタンパク質成分との間の違いを調査することでした。忍耐。さらに、そのタンパク質含有量に対する尿の遠心分離とろ過の効果を理解するために、予備研究が実施されました。尿中の結晶化は、シュウ酸塩またはリン酸負荷の添加により誘導されました。結晶を収集、洗浄、および走査電子顕微鏡、X線回折、およびエネルギー分散X線微量分析により分析しました。マトリックスタンパク質は、エチレンジアミンテトラ酢酸（EDTA）による脱灰によって得られ、ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって分析され、ウエスタンブロッティング技術によって同定されました。CaoxとCap結晶のマトリックスのタンパク質成分と、通常の尿と石形成の被験者の尿から得られた結晶マトリックスの間で、有意差は検出されませんでした。アルブミン（AB）、インターアルファ阻害剤（IALPHAI）関連タンパク質、アルファ-1ミクロブリン（アルファ-1 M）、オステオポンチン（OPN）、プロトロンビン（PT）関連タンパク質、およびTamm-horsfallタンパク質（THP）が特定されました。通常の被験者と石の形成者の両方から尿中に誘導されるCaoxとCapの両方の結晶のマトリックス。AB、PT関連タンパク質、およびOPNが主要成分でした。他のタンパク質は、より少ないが検出可能な量で存在していました。ただし、Cap Crystal Matrixには大量のTHPが含まれていました。さらに、キャップ結晶には、Caox結晶よりも有意に多くのタンパク質が含まれていました。尿の遠心分離および/またはろ過により、尿中のTHP、AB、OPNを含む多くの高分子量タンパク質が減少しました。

The purpose of our study was to identify the proteins and investigate the differences, if any, between protein components of the matrices of calcium oxalate (CaOx) and calcium phosphate (CaP) crystals induced in vitro in whole human urine of healthy individuals and kidney stone patients. In addition, preliminary studies were performed to understand the effect of centrifugation and filtration of urine on its protein contents. Crystallization in urine was induced by addition of an oxalate or phosphate load. Crystals were collected, washed, and analyzed by scanning electron microscopy, X-ray diffraction, and energy dispersive X-ray microanalysis. Matrix proteins were obtained by demineralization with ethylene diamine tetraacetic acid (EDTA), analyzed by polyacrylamide gel electrophoresis, and identified by western blotting technique. No significant differences were detected between protein components of the matrices of CaOx and CaP crystals and between the crystal matrices obtained from the urine of normal and stone forming subjects. Albumin (AB), inter-alpha-inhibitor (IalphaI) related proteins, alpha-1 microglobulin (alpha-1 m), osteopontin (OPN), prothrombin (PT)-related proteins and Tamm-Horsfall protein (THP) were identified in matrices of both CaOx and CaP crystals induced in urine from both the normal subjects and stone formers. AB, PT-related proteins and OPN were the main constituents. The other proteins were present in smaller but detectable amounts. However, CaP crystal matrix, contained a large amount of THP. In addition CaP crystals contained significantly more proteins than CaOx crystals. Centrifugation and/or filtration of the urine resulted in reduction of many high molecular weight proteins including THP, AB and OPN in the urine.