さまざまなポリメラーゼが過去のサイト固有のCIS-Syn、Trans-Syn-II、（6-4）、およびdewar光生成物を合成する能力 - （3 ' - > 5'） - チミジン

チミディリル（3 ' - > 5'） - チミジンの過去の光プロダクトを過去のポリヌクレオチド合成における光生成物構造、3 ' - > 5'エキソヌクレアーゼ活性、およびプロセス性の役割を調査しました。モロニーマウス白血病ウイルス逆転写酵素と3 ' - > 5'エキソヌクレアーゼ欠損（exo-）ベントポリメラーゼの両方がすべての光生成物によってブロックされましたが、TaqポリメラーゼはCis-synダイマーをゆっくりと迂回できました。T7 RNAポリメラーゼは、Cis-Syn> Dewar>（6-4）> Trans-Syn-IIの順序ですべての光生成物をバイパスすることができました。クレノウフラグメントは、光生成物のいずれもバイパスできませんでしたが、エクソミュータントはシスシンダイマーを他のものよりも大幅にバイパスできます。同様に、T7遺伝子5タンパク質と大腸菌チオレドキシンで構成されるT7 DNAポリメラーゼは、すべての光生成物によってブロックされましたが、エキソミュータントシーケナーゼ2.0は、すべてを順序ですべてバイパスすることができました。II>（6-4）。チオレドキシンプロセス因子がない場合、エキソ遺伝子5タンパク質でバイパスは発生しませんでした。Sequenase 2.0によるCIS-SynおよびTrans-Syn-II産物のバイパスは本質的に非変異性でしたが、DTMPは約20％のDTMPがデワール光生成物の5'-Tの反対側に挿入されました。光プロダクトの3'-Tの反対側の湿気の優先的な組み込みを説明するために、一時的な虐待部位を含むメカニズムが提案されています。

The role of photoproduct structure, 3' --> 5' exonuclease activity, and processivity on polynucleotide synthesis past photoproducts of thymidylyl-(3' --> 5')-thymidine was investigated. Both Moloney murine leukemia virus reverse transcriptase and 3' --> 5' exonuclease-deficient (exo-) Vent polymerase were blocked by all photoproducts, whereas Taq polymerase could slowly bypass the cis-syn dimer. T7 RNA polymerase was able to bypass all the photoproducts in the order cis-syn > Dewar > (6-4) > trans-syn-II. Klenow fragment could not bypass any of the photoproducts, but an exo- mutant could bypass the cis-syn dimer to a greater extent than the others. Likewise T7 DNA polymerase, composed of the T7 gene 5 protein and Escherichia coli thioredoxin, was blocked by all the photoproducts, but the exo- mutant Sequenase 2.0 was able to bypass them all in the order cis-syn > Dewar > trans-syn-II > (6-4). No bypass occurred with an exo- gene 5 protein in the absence of the thioredoxin processivity factor. Bypass of the cis-syn and trans-syn-II products by Sequenase 2.0 was essentially non-mutagenic, whereas about 20% dTMP was inserted opposite the 5'-T of the Dewar photoproduct. A mechanism involving a transient abasic site is proposed to account for the preferential incorporation of dAMP opposite the 3'-T of the photoproducts.