VLA-5は、マウスおよびヒトの長期再浸透造血細胞によって発現され、細胞外マトリックスタンパク質フィブロネクチンへの接着を媒介します

細胞外マトリックスタンパク質であるフィブロネクチン（FN）は、造血細胞の接着と移動に関与しており、標的細胞とレトロウイルスの共局在化により、in vitroの基質として使用される場合、原始造血細胞へのレトロウイルス遺伝子移動を促進することが示されています。マウス造血幹細胞は、認識配列Arg-Gly-ASP（RGD）を含むFNフラグメントに導入できることを以前に発見し、幹細胞がインテグリン非常に後期抗原（VLA）-5を発現する可能性があることを示唆しています。これに対処するために、fnの3つの原理細胞結合ドメインの1つまたは組み合わせを含む組換えペプチドへのマウスおよびヒト造血細胞の結合を調査しました。これらのドメインには、VLA-5結合配列RGD、VLA-4結合部位CS1、および高親和性ヘパリン結合ドメインが含まれていました。ここでは、マウスのin vivoの再栄養幹細胞、ならびに原始的なヒトNOD/SCIDマウス再播種細胞が、インテグリンVLA-5をin vitroで使用することにより細胞外マトリックスタンパク質FNに結合できることを示しています。この結合は特異的であり、VLA-5に対する抗体によって阻害される可能性があります。さらに、3つの主要なFN結合ドメインすべてを含むペプチドCH-296とのBM細胞のプレインキュベーションは、in vivoの骨髄の細胞の生着を減少させ、同じペプチドの静脈内注射により、同じペプチドの静脈内注射により、前駆細胞の増加が誘発されました。脾臓。要約すると、我々のデータは、VLA-5が原始マウスおよびヒト造血細胞で発現していることを示しており、インテグリン受容体とプロテオグリカン分子との間に骨髄細胞の染み込みとin vivoの造血細胞接着に有意な協力があるかもしれないことを示唆しています。

Fibronectin (FN), an extracellular matrix protein, is involved in the adhesion and migration of hematopoietic cells and has been shown to enhance retroviral gene transfer into primitive hematopoietic cells by co-localization of target cells and retrovirus when used as a substrate in vitro. We have previously found that mouse hematopoietic stem cells could be transduced on a FN fragment that included the recognition sequence Arg-Gly-Asp (RGD), suggesting that stem cells may express the integrin very late antigen (VLA)-5. To address this, we investigated the binding of mouse and human hematopoietic cells to recombinant peptides that contained one or a combination of the three principle cell-binding domains of FN. These domains included the VLA-5- binding sequence RGD, the VLA-4-binding site CS1, and the high affinity heparin-binding domain. Here we show that mouse long-term in vivo repopulating stem cells, as well as primitive human NOD/SCID mouse repopulating cells, can bind extracellular matrix protein FN by using integrin VLA-5 in vitro. This binding is specific and can be inhibited by antibodies to VLA-5. In addition, preincubation of BM cells with peptide CH-296, which contains all three primary FN-binding domains, decreased the engraftment of cells in the bone marrow in vivo, while intravenous injection of the same peptide induced an increase of progenitor cells in the spleen. In summary, our data demonstrate that VLA-5 is expressed on primitive mouse and human hematopoietic cells and suggest that there may be significant cooperation between integrin receptors and proteoglycan molecules in the engraftment of bone marrow cells and hematopoietic cell adhesion in vivo.