中央P2X4およびP2X6チャネルサブユニットは、新規ヘテロマーATP受容体にコーセンブルを組み立てます

イオノトロピックATP受容体は、哺乳類CNSで広く発現しています。異種発現システムにおけるニューロンホモマーP2X受容体の広範な機能特性化にもかかわらず、天然の中心P2X ATP依存チャネルのサブユニット組成は解明されていない。P2X4およびP2X6は、局所レベルと細胞レベルの両方で非常に重複するmRNA分布を持つ主要な中央サブユニットです。アフリカツメガエル卵母細胞でのみ発現する場合、P2X6サブユニットはATPアプリケーションに反応する表面受容体に組み立てられません。一方、P2X4サブユニットは、部分的なアゴニストアルファ、ベータメチレンATP、および非競合的拮抗薬スラミンおよびピリドキサール-5-ホスフェート-6-アジフェニル-2 '、ゆっくりと脱感作し、弱く敏感に敏感になります。4'-ジスルホン酸。ここでは、アフリカツメガエル卵母細胞におけるp2x4およびp2x6サブユニットの共発現が、イオノトロピックATP受容体の新規薬理学的表現型の生成につながることを実証します。ヘテロマーP2X4+6受容体は、低顕微鏡α、ベータメチレンATP（EC50 = 12 microM）によって活性化され、スラミンと低濃度の特性を持つ反応性青2によって活性化され、ホモマーP2X4受容体を増強します。P2X4サブユニットを使用したP2X4のアセンブリは、さまざまなエピトープタグ付きP2Xチャネルサブユニットで一時的にトランスフェクトされたHEK-293細胞からの特定の順序化によって示されるように、サブユニット依存的相互作用に起因します。我々のデータは、哺乳類CNSで観察されたp2x4およびp2x6サブユニットの神経局在の多数の症例が、独自の機能特性を持つヘテロマーP2X4+6チャネルのネイティブ発現を反映していることを強く示唆しています。

Ionotropic ATP receptors are widely expressed in mammalian CNS. Despite extensive functional characterization of neuronal homomeric P2X receptors in heterologous expression systems, the subunit composition of native central P2X ATP-gated channels remains to be elucidated. P2X4 and P2X6 are major central subunits with highly overlapping mRNA distribution at both regional and cellular levels. When expressed alone in Xenopus oocytes, P2X6 subunits do not assemble into surface receptors responsive to ATP applications. On the other hand, P2X4 subunits assemble into bona fide ATP-gated channels, slowly desensitizing and weakly sensitive to the partial agonist alpha,beta-methylene ATP and to noncompetitive antagonists suramin and pyridoxal-5-phosphate-6-azophenyl-2',4'-disulfonic acid. We demonstrate here that the coexpression of P2X4 and P2X6 subunits in Xenopus oocytes leads to the generation of a novel pharmacological phenotype of ionotropic ATP receptors. Heteromeric P2X4+6 receptors are activated by low-micromolar alpha, beta-methylene ATP (EC50 = 12 microM) and are blocked by suramin and by Reactive Blue 2, which has the property, at low concentrations, to potentiate homomeric P2X4 receptors. The assembly of P2X4 with P2X6 subunits results from subunit-dependent interactions, as shown by their specific copurification from HEK-293 cells transiently transfected with various epitope-tagged P2X channel subunits. Our data strongly suggest that the numerous cases of neuronal colocalizations of P2X4 and P2X6 subunits observed in mammalian CNS reflect the native expression of heteromeric P2X4+6 channels with unique functional properties.