モロニーマウス白血病ウイルス逆転写酵素のリボヌクレアーゼHドメインを折りたたむには、金属結合または短いN末端拡張が必要です

逆転写酵素（RT）は、分離可能なドメインにおけるポリメラーゼとリボヌクレアーゼH（RNase H）活性を運ぶモジュラー酵素です。レトロウイルスの複製には、これらの両方の活動が必要です。RNase Hドメインは、RNA X DNAハイブリッドのRNA部分の加水分解の原因であり、この活性には、その活性部位に結合する二価カチオン（Mg2+またはMn2+）の存在が必要です。このドメインは、大腸菌のRNase Hiタンパク質が最も特徴づけられた相同rNase H酵素の大規模ファミリーの一部です。ヒト免疫不全ウイルスRTからの分離されたRNase Hドメインは非アクティブですが、モロニーマウス白血病ウイルス（MMLV）ドメインはポリメラーゼドメインの非存在下で活動しているため、機能的研究がよりアクセスしやすくなります。循環二色性分光法を使用して、RNase H活性を保持するMMLV RTの2つの異なる断片の安定性と折り畳みを特徴付けました。RTの157のC末端残基に対応する小さな断片は、二重の陽イオンの存在下では主に展開されますが、金属の添加により折りたたみが誘発される可能性があります。ただし、175のC末端残基に対応する大きな断片は、金属の非存在下で安定して折りたたまれています。したがって、大腸菌RNase HIと相同な領域外の18残基N末端拡張は、MMLV RTのRNase Hドメインの構造安定性にとって重要です。したがって、この領域はRNase Hドメインの一部と見なされる必要があります。

Reverse transcriptase (RT) is a modular enzyme carrying polymerase and ribonuclease H (RNase H) activities in separable domains. Retroviral replication requires both of these activities. The RNase H domain is responsible for hydrolysis of the RNA portion of RNA x DNA hybrids, and this activity requires the presence of divalent cations (Mg2+ or Mn2+) that bind its active site. This domain is a part of a large family of homologous RNase H enzymes of which the RNase HI protein from Escherichia coli is the best characterized. Although the isolated RNase H domain from human immunodeficiency virus RT is inactive, the Moloney murine leukemia virus (MMLV) domain is active in the absence of the polymerase domain, making functional studies more accessible. Using circular dichroism spectroscopy, we characterized the stability and folding of two different fragments of MMLV RT that retain RNase H activity. The smaller fragment corresponding to the 157 C-terminal residues of RT is predominantly unfolded in the absence of divalent cations, but folding can be induced by the addition of metal. The larger fragment corresponding to the 175 C-terminal residues, however, is stably folded in the absence of metal. Thus, an 18 residue N-terminal extension outside the region homologous to E. coli RNase HI is important for the structural stability of the RNase H domain of MMLV RT. Therefore, this region should be considered part of the RNase H domain.