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ヌクレアーゼ活性アッセイのジモグラム法から、cunninghamella echinulata var。エキノラタには、少なくとも3つの異なる細胞外ヌクレアーゼが含まれていました。その中で、主要な形態は分子量の30 kDaであり、ヌクレアーゼC1と呼ばれていました。このレポートでは、ヌクレアーゼC1は、シバクロンブルー3GA、フェニルセファロース4B、およびヒットラップヘパリンのクロマトグラフィーにより、見かけの均一性に精製されました。ヌクレアーゼC1は、Mn2+またはMg2+の存在下で酵素活性を獲得し、EDTAによって阻害されました。アクティビティはpH 7-8.5で最大でした。ヌクレアーゼC1の主要な構造は、酵素消化と遺伝子クローニングを使用して完全に決定されました。ヌクレアーゼC1のN末端49残基は、最初にトリプシン消化から解明されました。その後、ヌクレアーゼC1をコードするcDNAを増幅するように、2つの縮退した上流プライマーが設計されました。ヌクレアーゼC1の結果として得られたタンパク質配列は、252残基で構成されていることが示されました。ヌクレアーゼC1のタンパク質配列が、Saccharomyces cerevisiae（44％同一性）およびSchizosaccharomyces Pombe（42％同一性）のミトコンドリアヌクレアーゼの配列と有意な類似性を示したことを発見するのは興味深いことでした。Nuclease C1の残基His87は、セラティアMarcescensの分泌ヌクレアーゼとの配列類似性から活性部位に位置すると仮定されました。
ヌクレアーゼ活性アッセイのジモグラム法から、cunninghamella echinulata var。エキノラタには、少なくとも3つの異なる細胞外ヌクレアーゼが含まれていました。その中で、主要な形態は分子量の30 kDaであり、ヌクレアーゼC1と呼ばれていました。このレポートでは、ヌクレアーゼC1は、シバクロンブルー3GA、フェニルセファロース4B、およびヒットラップヘパリンのクロマトグラフィーにより、見かけの均一性に精製されました。ヌクレアーゼC1は、Mn2+またはMg2+の存在下で酵素活性を獲得し、EDTAによって阻害されました。アクティビティはpH 7-8.5で最大でした。ヌクレアーゼC1の主要な構造は、酵素消化と遺伝子クローニングを使用して完全に決定されました。ヌクレアーゼC1のN末端49残基は、最初にトリプシン消化から解明されました。その後、ヌクレアーゼC1をコードするcDNAを増幅するように、2つの縮退した上流プライマーが設計されました。ヌクレアーゼC1の結果として得られたタンパク質配列は、252残基で構成されていることが示されました。ヌクレアーゼC1のタンパク質配列が、Saccharomyces cerevisiae（44％同一性）およびSchizosaccharomyces Pombe（42％同一性）のミトコンドリアヌクレアーゼの配列と有意な類似性を示したことを発見するのは興味深いことでした。Nuclease C1の残基His87は、セラティアMarcescensの分泌ヌクレアーゼとの配列類似性から活性部位に位置すると仮定されました。
It is known, from the zymogram method of nuclease activity assay, that the crude extracts of Cunninghamella echinulata var. echinulata contained at least three distinct extracellular nucleases. Among them, the major form was 30 kDa in molecular mass and termed nuclease C1. In this report, nuclease C1 was purified to apparent homogeneity by chromatography on Cibacron blue-3GA, phenyl-Sepharose 4B and HiTrap Heparin. Nuclease C1 acquired enzymatic activity in the presence of Mn2+ or Mg2+ and was inhibited by EDTA. The activity was maximal at pH 7-8.5. The primary structure of nuclease C1 was completely determined using enzymatic digestion and gene cloning. The N-terminal 49 residues of nuclease C1 were first elucidated from a tryptic digest. Two degenerate upstream primers were subsequently designed to amplify the cDNA encoding nuclease C1. The resulting protein sequence of nuclease C1 was shown to be composed of 252 residues. It was intriguing to find that the protein sequence of nuclease C1 showed significant similarities with the sequences of the mitochondrial nucleases of Saccharomyces cerevisiae (44% identity) and Schizosaccharomyces pombe (42% identity). Residue His87 of nuclease C1 was postulated to be located at the active site from sequence similarity with secreted nuclease from Serratia marcescens.
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