出芽酵母RAD9チェックポイントタンパク質は、Mec1/Tel1依存性過剰リン酸化にさらされ、DNA損傷後にRad53と相互作用します

Saccharomyces cerevisiae rad9チェックポイント遺伝子は、DNA損傷に応じて一時的な細胞周期停止とDNA修復遺伝子の転写誘導に必要です。RAD9タンパク質に対して飼育されたポリクローナル抗体は、非同期培養およびSまたはG2/M相で阻止された細胞でいくつかのポリペプチドを認識しましたが、G1逮捕細胞では単一の型が観察されました。さまざまなDNA損傷剤、すなわち紫外線、イオン化放射またはメチルメタンスルホン酸塩による治療により、タンパク質過剰拡張型の出現が生じました。正常な細胞周期およびDNA損傷後に検出されたすべての修飾は、ホスファターゼ治療に敏感であり、リン酸化に起因することを示しています。Rad9の損傷誘発性過リン酸化は、チェックポイント機能（細胞周期停止および転写誘導）と相関し、細胞周期の段階および進行に依存していませんでした。非同期培養では、Rad9過剰リン酸化は、ATRおよびATM遺伝子のホモログであるMec1およびTel1に依存していました。G1逮捕細胞では、DNA損傷に対するこの応答におけるチェックポイント遺伝子の細胞周期の特異性を示しているRad17、Rad24、Mec3、およびDDC1に加えて、損傷依存性過剰酸化が機能する必要がありました。DNA損傷後のチェックポイントタンパク質相互作用の分析により、Rad9がRad53と物理的に関連することが明らかになりました。

The Saccharomyces cerevisiae RAD9 checkpoint gene is required for transient cell-cycle arrests and transcriptional induction of DNA repair genes in response to DNA damage. Polyclonal antibodies raised against the Rad9 protein recognized several polypeptides in asynchronous cultures, and in cells arrested in S or G2/M phases while a single form was observed in G1-arrested cells. Treatment with various DNA damaging agents, i.e. UV, ionizing radiation or methyl methane sulfonate, resulted in the appearance of hypermodified forms of the protein. All modifications detected during a normal cell cycle and after DNA damage were sensitive to phosphatase treatment, indicating that they resulted from phosphorylation. Damage-induced hyperphosphorylation of Rad9 correlated with checkpoint functions (cell-cycle arrest and transcriptional induction) and was cell-cycle stage- and progression-independent. In asynchronous cultures, Rad9 hyperphosphorylation was dependent on MEC1 and TEL1, homologues of the ATR and ATM genes. In G1-arrested cells, damage-dependent hyperphosphorylation required functional MEC1 in addition to RAD17, RAD24, MEC3 and DDC1, demonstrating cell-cycle stage specificity of the checkpoint genes in this response to DNA damage. Analysis of checkpoint protein interactions after DNA damage revealed that Rad9 physically associates with Rad53.