Snf1プロテインキナーゼは、Saccharomyces cerevisiaeのMig1リポッレッサーのリン酸化を調節します

グルコース栽培細胞では、Mig1 DNA結合タンパク質がSSN6-TUP1コアプレス因子を酵母Saccharomyces cerevisiaeのグルコース再生プロモーターに動員します。以前の研究は、Mig1がグルコースに応答して差次的にリン酸化されることを示しました。ここでは、抑制の調節におけるMig1の役割と、Mig1機能の調節におけるSnf1プロテインキナーゼの役割を調べます。SNF1変異体からのMig1タンパク質の免疫ブロット分析により、Snf1がMig1のリン酸化に必要であることが示されました。さらに、Snf1のグルコース阻害を緩和するHxk2およびReg1変異は、それに応じてMig1のリン酸化に影響します。Snf1とMig1は2ハイブリッドシステムで相互作用し、細胞抽出物からの共免疫沈着物も示し、2つのタンパク質がin vivoで相互作用することを示しています。SNF1の免疫複合体アッセイでは、Mig1の共沈化はSNF1依存性反応でリン酸化されます。Mig1の4つの推定SNF1認識部位の変異により、in vivoでのグルコースに応答したMig1の差異リン酸化のほとんどが排除され、Snf1との2ハイブリッド相互作用が改善されました。これらの研究は、以前の遺伝的所見とともに、Snf1プロテインキナーゼがグルコースに応答してMig1のリン酸化を調節することを示しています。

In glucose-grown cells, the Mig1 DNA-binding protein recruits the Ssn6-Tup1 corepressor to glucose-repressed promoters in the yeast Saccharomyces cerevisiae. Previous work showed that Mig1 is differentially phosphorylated in response to glucose. Here we examine the role of Mig1 in regulating repression and the role of the Snf1 protein kinase in regulating Mig1 function. Immunoblot analysis of Mig1 protein from a snf1 mutant showed that Snf1 is required for the phosphorylation of Mig1; moreover, hxk2 and reg1 mutations, which relieve glucose inhibition of Snf1, correspondingly affect phosphorylation of Mig1. We show that Snf1 and Mig1 interact in the two-hybrid system and also coimmunoprecipitate from cell extracts, indicating that the two proteins interact in vivo. In immune complex assays of Snf1, coprecipitating Mig1 is phosphorylated in a Snf1-dependent reaction. Mutation of four putative Snf1 recognition sites in Mig1 eliminated most of the differential phosphorylation of Mig1 in response to glucose in vivo and improved the two-hybrid interaction with Snf1. These studies, together with previous genetic findings, indicate that the Snf1 protein kinase regulates phosphorylation of Mig1 in response to glucose.