ヒトBプレキューサーの急性リンパ芽球性白血病細胞への遺伝子送達

免疫刺激分子を発現するように設計された自家白血病細胞を使用して、抗不尿症免疫反応を引き出すことができます。ヒトB前駆除への遺伝子送達急性リンパ芽球性白血病（ALL）細胞は、フローサイトメトリーで測定されたレポーター遺伝子として強化された緑色蛍光タンパク質（EGFP）を使用して調査されました。NALM-6およびREH B前cursorのトランスフェクションは、発現プラスミドを使用したすべての白血病細胞株を、脂肪分解、エレクトロポレーション、および多型化合物を使用して調査しました。リポソーム化合物のセルフェクチンのみが有意な遺伝子導入を示しました（NALM-6細胞で3.9％から12％、REH細胞で3.1％から5％）。ギボンと皮膚の白血病ウイルスを伴う乳化型のモロニーマウス白血病ウイルス（MOMULV）ベースのレトロウイルスベクターをさまざまな環境で調査しました。包装細胞株を伴うすべての細胞株の共培養は、レトロウイルス遺伝子導入の最も高い形質導入効率を示しました（NALM-6細胞では40.1％から87.5％、REH細胞で0.3％から9％）、その後、組換えフィブロネチンのウイルス超自然との形質導入が続きます。フラグメントCH-296（NALM-6細胞で13％から35.5％および0.4％〜6％REH細胞）、ヒト骨髄間質単層（NALM-6細胞で3.2％から13.3％、0％から0.2％ReH細胞）、および硫酸プロタミンによる懸濁液（NALM-6細胞では0.7％から3.1％、REH細胞で0％）。NALM-6およびREH細胞の両方のヒト免疫不全ウイルス型1（HIV-1）ベースのレンチウイルスベクターを植物型ウイルスgエンベロープと仮名化した形質導入は、最良の遺伝子移動効率を生成し、両方の細胞株の90％を超える最良の遺伝子移動効率を生成しました。。次に、患者からのすべての細胞への原発性ヒトB前cursへの遺伝子送達は、MomulvベースのレトロウイルスベクターとHIV-1ベースのレンチウイルスベクターを使用して調査されました。両方のベクトルは、高い効率を持つすべての細胞の主要なB前駆除を導入しました。これらの研究は、免疫療法に使用される原発性ヒトBプレカューザーのすべての細胞への遺伝子送達を調査するために適用される場合があります。

Autologous leukemia cells engineered to express immune-stimulating molecules may be used to elicit antileukemia immune responses. Gene delivery to human B-precursor acute lymphoblastic leukemia (ALL) cells was investigated using the enhanced green fluorescent protein (EGFP) as a reporter gene, measured by flow cytometry. Transfection of the Nalm-6 and Reh B-precursor ALL leukemia cell lines with an expression plasmid was investigated using lipofection, electroporation, and a polycationic compound. Only the liposomal compound Cellfectin showed significant gene transfer (3.9% to 12% for Nalm-6 cells and 3.1% to 5% for Reh cells). Transduction with gibbon-ape leukemia virus pseudotyped Moloney murine leukemia virus (MoMuLV)-based retrovirus vectors was investigated in various settings. Cocultivation of ALL cell lines with packaging cell lines showed the highest transduction efficiency for retroviral gene transfer (40.1% to 87.5% for Nalm-6 cells and 0.3% to 9% for Reh cells), followed by transduction with viral supernatant on the recombinant fibronectin fragment CH-296 (13% to 35.5% for Nalm-6 cells and 0.4% to 6% Reh cells), transduction on human bone marrow stroma monolayers (3.2% to 13.3% for Nalm-6 cells and 0% to 0.2% Reh cells), and in suspension with protamine sulfate (0.7% to 3.1% for Nalm-6 cells and 0% for Reh cells). Transduction of both Nalm-6 and Reh cells with human immunodeficiency virus-type 1 (HIV-1)-based lentiviral vectors pseudotyped with the vesicular stomatitis virus-G envelope produced the best gene transfer efficiency, transducing greater than 90% of both cell lines. Gene delivery into primary human B-precursor ALL cells from patients was then investigated using MoMuLV-based retrovirus vectors and HIV-1-based lentivirus vectors. Both vectors transduced the primary B-precursor ALL cells with high efficiencies. These studies may be applied for investigating gene delivery into primary human B-precursor ALL cells to be used for immunotherapy.