ゴルジからin vitroでの逆行輸送の再構成

ゴルジからERへの逆行輸送は、不可欠なプロセスです。ゴルジとERの間をサイクリングするERおよびタンパク質を逃れる居住ERタンパク質を取得する必要があります。順行性および逆行性の小胞の人身売買の相互依存性により、両方のプロセスの解剖がin vivoで困難になります。私たちは、可溶性レポータータンパク質の検索を測定するin vitroシステムを開発しました。これは、COOH末端（Dean、N。、およびH.R.BPelham。1990で検索信号（HDEL）に融合した酵母フェロモンアルファファクターの前駆体の前駆体）を測定しました。J. Cell Biol。検索はHDELシーケンスに依存します。自然にこのシーケンスを欠いているアルファファクターの前駆体は、取得されません。順行性および逆行性輸送の完全なサイクルには、SEC18P、LMA1P複合体、USO1P、コートマー、ARF1Pを含む精製細胞質タンパク質の単純なセットが必要です。膜結合V-SNAP受容体（V-SNARE）タンパク質の中で、BOS1Pは順方向輸送にのみ必要であり、SEC22Pは逆行性輸送のみで必要であり、BET1Pは両方の輸送手段に関与しています。ゴルジ濃縮膜から生成された推定逆行性キャリア（コピー小胞）には、貨物としてのemp47pだけでなく、v-snaresが含まれています。

Retrograde transport from the Golgi to the ER is an essential process. Resident ER proteins that escape the ER and proteins that cycle between the Golgi and the ER must be retrieved. The interdependence of anterograde and retrograde vesicle trafficking makes the dissection of both processes difficult in vivo. We have developed an in vitro system that measures the retrieval of a soluble reporter protein, the precursor of the yeast pheromone alpha-factor fused to a retrieval signal (HDEL) at its COOH terminus (Dean, N., and H.R.B Pelham. 1990. J. Cell Biol. 111:369-377). Retrieval depends on the HDEL sequence; the alpha-factor precursor, naturally lacking this sequence, is not retrieved. A full cycle of anterograde and retrograde transport requires a simple set of purified cytosolic proteins, including Sec18p, the Lma1p complex, Uso1p, coatomer, and Arf1p. Among the membrane-bound v-SNAP receptor (v-SNARE) proteins, Bos1p is required only for forward transport, Sec22p only for retrograde trafficking, and Bet1p is implicated in both avenues of transport. Putative retrograde carriers (COPI vesicles) generated from Golgi-enriched membranes contain v-SNAREs as well as Emp47p as cargo.