Gナトリウム利尿ペプチドクリアランス受容体を介した平滑筋ENOのタンパク質依存性活性化

胃腸平滑筋では、神経ペプチド血管作用性腸ペプチド（VIP）および下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（PACAP）は、GSを介してAdenylyl Cyclaseとadenylil cyclaseを介してGi1とGi2に相互作用するVIP2/PACAP3受容体を相互作用することにより弛緩を誘導します。酸化物シンターゼ（ENOS）。本研究では、受容体が単一トランスマンブレンナトリックペプチドクリアランス受容体（NPR-C）として特定されています。RT-PCRおよび北部分析により、ウサギ胃筋細胞ではNPR-CおよびNPR-Bのナトリウム利尿ペプチド受容体NPR-Bの発現が示されました。ラジオリガンド、VIP、ANP、および選択的NPR-CリガンドCANP（4-23）として、125i標識心房性ナトリウム利尿ペプチド（125-ANP）および125-VIPを使用した結合研究では、NPR-Cに高親和性と結合しました。ANP、CANP-（4-23）、およびVIPは、Ca2+流入、Gi1およびGi2を介したENOSの活性化、CGMP形成の刺激、および筋肉弛緩からなる同一のシグナル伝達カスケードを開始しました。NOS活性とCGMP形成は、ニフェジピン、百日咳毒素、NOS阻害剤、Ng-Nitro-L-アルギニン、およびアンタゴニストANP-（1-11）およびVIP-（10-28）により、廃止されました（93 +/- 3〜96 +/- 2％阻害）。筋肉膜中の3つのリガンドすべてによって刺激されたNOS活性は、Gi1およびGi2抗体（82 +/- 2〜84 +/- 1％）によって追加的に阻害されました。再構成研究では、VIP、CANP-（4-23）、およびグアノシン5'-O-（3-チオトリンリン酸）は、NPR-CおよびENOSを共有したCOS-1細胞の膜におけるNOS活性を刺激しました。結果は、弛緩薬の神経ペプチドVIPとPacAPとの単一トランスマンブレンナトリックペプチド受容体、NPR-C。

In gastrointestinal smooth muscle, the neuropeptides vasoactive intestinal peptide (VIP) and pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide (PACAP) induce relaxation by interacting with VIP2/PACAP3 receptors coupled via Gs to adenylyl cyclase and with distinct receptors coupled via Gi1 and/or Gi2 to a smooth muscle endothelial nitric oxide synthase (eNOS). The present study identifies the receptor as the single-transmembrane natriuretic peptide clearance receptor (NPR-C). RT-PCR and Northern analysis demonstrated expression of the natriuretic peptide receptors NPR-C and NPR-B but not NPR-A in rabbit gastric muscle cells. In binding studies using 125I-labeled atrial natriuretic peptide (125I-ANP) and 125I-VIP as radioligands, VIP, ANP, and the selective NPR-C ligand cANP(4-23) bound with high affinity to NPR-C. ANP, cANP-(4-23), and VIP initiated identical signaling cascades consisting of Ca2+ influx, activation of eNOS via Gi1 and Gi2, stimulation of cGMP formation, and muscle relaxation. NOS activity and cGMP formation were abolished (93 +/- 3 to 96 +/- 2% inhibition) by nifedipine, pertussis toxin, the NOS inhibitor, NG-nitro-L-arginine, and the antagonists ANP-(1-11) and VIP-(10-28). NOS activity stimulated by all three ligands in muscle membranes was additively inhibited by Gi1 and Gi2 antibodies (82 +/- 2 to 84 +/- 1%). In reconstitution studies, VIP, cANP-(4-23), and guanosine 5'-O-(3-thiotriphosphate) stimulated NOS activity in membranes of COS-1 cells cotransfected with NPR-C and eNOS. The results establish a unique mechanism for G protein-dependent activation of a constitutive NOS expressed in gastrointestinal smooth muscle involving interaction of the relaxant neuropeptides VIP and PACAP with a single-transmembrane natriuretic peptide receptor, NPR-C.