CBH2（Cellobiohydrolase II-Encoding）のCBH2（Cellobiohydrolase）プロモーターの2つの隣接するタンパク質結合モチーフ（Trichoderma reesei）のプロモーターは、セルロースによる誘導に協力します

糸状の真菌性菌のセルラーゼ系（Trichoderma reeSei）は、セルロースまたはdisaccharose disccharide of of disccharideの存在で協調的に発現する別の遺伝子によってコードされるいくつかのセロビオヒドロラーゼ、エンドグルカナーゼ、およびベータ - グルコシダーゼで構成されています。ソフォロース誘発性および非誘導菌糸体からの細胞を含まない抽出物および電気泳動移動性シフトアッセイ（EMSA）分析とin vitroおよびin vivoフットプリント分析の実行におけるH. jecorinaのCBH2プロモーターのさまざまな断片を使用して、核小物シーケンス5'-ATTGGTAATA-3 '（CA）を検出しました。誘導および非誘導細胞のない抽出物のEMSAに異なる移動を伴うタンパク質複合体。CAEの特異的に変異したバージョンを含むオリゴヌクレオチドフラグメントを使用したEMSA分析では、タンパク質結合には、2つの隣接するモチーフのいずれかの無傷のコピーが必要であることが明らかになりました。H. Jecorina Transporantは、レポーターとしてEscherichia coli HPH遺伝子に融合したCBH2プロモーターの対応する変異バージョンを含み、EMSAにおけるCAEタンパク質複合体形成の有効性に並行する方法でHPHを発現し、両方のモチーフの存在がCBH2遺伝子転写の導入に必要であることを示唆しています。抗体スーシフト抗HAPC抗血清を使用した抗体スーシフト実験と、Aspergillus nidulans AMDSプロモーターのCCAAT結合プロモーターフラグメントを使用したEMSA競合実験は、H。JecorinaCCAATボックス結合複合体がHAPCのホモログを含むことを示唆しています。隣接するGTAATA結合タンパク質の性質と、CBH2遺伝子誘導におけるHAPCホモログとの協力について説明します。

The cellulase system of the filamentous fungus Hypocrea jecorina (Trichoderma reesei) consists of several cellobiohydrolases, endoglucanases, and beta-glucosidases, encoded by separate genes, which are coordinately expressed in the presence of cellulose or the disaccharide sophorose. Using cell-free extracts from sophorose-induced and noninduced mycelia and various fragments of the cbh2 promoter of H. jecorina in electrophoretic mobility shift assay (EMSA) analysis and performing in vitro and in vivo footprinting analysis, we detected the nucleotide sequence 5'-ATTGGGTAATA-3' (consequently named cbh2-activating element (CAE)) to bind a protein complex with different migration in EMSA of induced and noninduced cell-free extracts. EMSA analysis, employing oligonucleotide fragments containing specifically mutated versions of CAE, revealed that protein binding requires the presence of an intact copy of either one of two adjacent motifs: a CCAAT (=ATTGG) box on the template strand and a GTAATA box on the coding strand, whereas a simultaneous mutation in both completely abolished binding. H. jecorina transformants, containing correspondingly mutated versions of the cbh2 promoter fused to the Escherichia coli hph gene as a reporter, expressed hph in a manner paralleling the efficacy of CAE-protein complex formation in EMSA, suggesting that the presence of either of both motifs is required for induction of cbh2 gene transcription. Antibody supershift experiments with anti-HapC antiserum as well as EMSA competition experiments with CCAAT binding promoter fragments of the Aspergillus nidulans amdS promoter suggest that the H. jecorina CCAAT box binding complex contains a homologue of HapC. The nature of the adjacent, GTAATA-binding protein(s) and its cooperation with the HapC homologue in cbh2 gene induction is discussed.