生物発光共鳴エネルギー移動（BRET）システム：相互作用する概日時計タンパク質への応用

以前のアッセイよりも魅力的な利点を提供するタンパク質相互作用をアッセイする方法について説明します。生物発光共鳴エネルギー移動（BRET）と呼ばれるこの方法は、ある候補タンパク質に遺伝的に融合された生物発光性ルシフェラーゼと、対象の別のタンパク質に融合した緑色蛍光タンパク質変異体を使用します。2つの融合タンパク質間の相互作用により、ルシフェラーゼと緑色の蛍光タンパク質が共鳴エネルギー移動が発生するのに十分なほど近づけ、生物発光の色を変化させる可能性があります。シアノバクテリアの概日（毎日の）時計遺伝子によってコードされるタンパク質を使用することにより、ブレット技術を使用して、クロックタンパク質Kaibが相互作用してホモダイマーを形成することを示します。ブレットは、特に特定のオルガネラを標的とした組織膜タンパク質またはタンパク質を使用して、天然細胞内のタンパク質相互作用をテストするのに特に役立つはずです。

We describe a method for assaying protein interactions that offers some attractive advantages over previous assays. This method, called bioluminescence resonance energy transfer (BRET), uses a bioluminescent luciferase that is genetically fused to one candidate protein, and a green fluorescent protein mutant fused to another protein of interest. Interactions between the two fusion proteins can bring the luciferase and green fluorescent protein close enough for resonance energy transfer to occur, thus changing the color of the bioluminescent emission. By using proteins encoded by circadian (daily) clock genes from cyanobacteria, we use the BRET technique to demonstrate that the clock protein KaiB interacts to form homodimers. BRET should be particularly useful for testing protein interactions within native cells, especially with integral membrane proteins or proteins targeted to specific organelles.