蛍光色素の光還元2'-7'-ジクロロフルオレセイン：酸化ストレス測定に影響を伴うスピントラッピングおよび直接電子スピン共鳴研究

2'-7'-ジクロロフルオレセイン（DCF）の光還元は、直接電子スピン共鳴（ESR）とESRスピントラップ技術を使用して、バッファー溶液で調査されました。還元剤の存在下でのDCFの反応の嫌気性研究により、目に見える照射中（ラムダ> 300 nm）2'-7'-ジクロロフルオレセインが1エレクトロン還元を受けるために、直接ESRが示すようにセミキノン型フリーラジカルを生成することが示されました。DCF、5,5-ジメチル-1-ピロリンn-酸化物（DMPO）を含むインキュベーションのスピン閉じた研究、および目に見える光の照射下で、スーパーオキシドジスムターゼセンシティブの産生を照射して、グルタチオン（GSH）またはNADHの減少が示すdmpo/*ooh付加物。DMPOがない場合、クラーク型酸素電極を使用した測定は、分子酸素が光依存プロセスで消費されることを示しています。有酸素系で形成されると、DCFのセミキノンラジカルは、酸素によってすぐに酸化され、色素を再生し、スーパーオキシドを形成します。

The photoreduction of 2'-7'-dichlorofluorescein (DCF) was investigated in buffer solution using direct electron spin resonance (ESR) and the ESR spin-trapping technique. Anaerobic studies of the reaction of DCF in the presence of reducing agents demonstrated that during visible irradiation (lambda > 300 nm) 2'-7'-dichlorofluorescein undergoes one-electron reduction to produce a semiquinone-type free radical as demonstrated by direct ESR. Spin-trapping studies of incubations containing DCF, 5,5-dimethyl-1-pyrroline N-oxide (DMPO) and either reduced glutathione (GSH) or reduced NADH demonstrate, under irradiation with visible light, the production of the superoxide dismutase-sensitive DMPO/*OOH adduct. In the absence of DMPO, measurements with a Clark-type oxygen electrode show that molecular oxygen is consumed in a light-dependent process. The semiquinone radical of DCF, when formed in an aerobic system, is immediately oxidized by oxygen, which regenerates the dye and forms superoxide.