RBL-2H3マスト細胞における脱顆粒応答のダウンレギュレーションにおけるアクチンマイクロフィラメントの役割

ラット好塩基性白血病（RBL）細胞上のfcepsilonriの架橋は、細胞の脱顆粒と炎症性メディエーターの放出につながるシグナル伝達カスケードを開始します。ラトリンキュリンやシトカラシンDなどのマイクロフィラメントを破壊する阻害剤は、それ自体で脱顆粒を引き起こしませんが、fcepsilonriを介した脱顆粒を促進します。用量反応研究は、アクチン重合の阻害と脱顆粒の増加との間に良好な相関を示しています。RBL細胞では、ラトランクリンは糸状アクチン（F-アクチン）の基底レベルの減少を引き起こしますが、シトカラシンDはそうではありません。これは、高度に架橋され、原形質膜に関連するF-アクチンのトリトン無溶性プールで特に顕著です。500 nMのラトランクリンの濃度は、トリトン溶融F-アクチンの基底レベルを60-70％、総F-アクチンレベルを25％減少させます。ラトランクリンは、ペルバナデート誘発脱顆粒に影響を与えない一方で、Ag誘発性脱顆粒の速度と程度を増加させます。ペルバナデートはシグナル伝達経路を直接活性化し、受容体の架橋をバイパスします。ラトランクリンの存在下でfcepsilonriを介して活性化されたRBL細胞は、ホスホリパーゼ活性の増加と、シクのチロシンリン酸化の増加とチロシンキナーゼLynによる受容体自体のチロシンリン酸化の増加を示します。これは、受容体の架橋後の非常に初期のシグナル伝達イベントが強化されたことを示しています。これらの結果は、アクチンマイクロフィラメントが受容体自体と直接的または間接的に相互作用し、受容体のリン酸化レベルでシグナル伝達プロセスを調節する可能性があることを示唆しています。マイクロフィラメントは、架橋受容体からLynを除去することにより作用する可能性があります。

Cross-linking of FcepsilonRI on rat basophilic leukemia (RBL) cells initiates a signaling cascade leading to degranulation of the cells and the release of inflammatory mediators. Inhibitors that disrupt microfilaments, such as latrunculin and cytochalasin D, do not cause any degranulation on their own, but they do enhance FcepsilonRI-mediated degranulation. Dose-response studies show a good correlation between inhibition of actin polymerization and increased degranulation. In RBL cells, latrunculin causes a decrease in basal levels of filamentous actin (F-actin), while cytochalasin D does not. This is particularly evident in the Triton-insoluble pool of F-actin which is highly cross-linked and associated with the plasma membrane. A concentration of 500 nM latrunculin decreases the basal level of Triton-insoluble F-actin by 60-70% and total F-actin levels by 25%. Latrunculin increases both the rate and extent of Ag-induced degranulation while having no effect on pervanadate-induced degranulation. Pervanadate activates the signaling pathways directly and bypasses the cross-linking of the receptor. RBL cells, activated through FcepsilonRI in the presence of latrunculin, show increased phospholipase activity as well as increased tyrosine phosphorylation of Syk and increased tyrosine phosphorylation of the receptor itself by the tyrosine kinase Lyn. This indicates that the very earliest signaling events after receptor cross-linking are enhanced. These results suggest that actin microfilaments may interact, either directly or indirectly, with the receptor itself and that they may regulate the signaling process at the level of receptor phosphorylation. Microfilaments may possibly act by uncoupling Lyn from the cross-linked receptor.