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Nucleic acids research1999Mar01Vol.27issue(5)

酵母TRP4遺伝子の単一点変異は、mRNA 3 'エンド処理の効率に影響し、ポリ(a)部位の選択を変化させます

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文献タイプ:
  • Journal Article
  • Research Support, Non-U.S. Gov't
概要
Abstract

酵母TRP4 mRNA 3 '末端形成要素は、人工in vivo試験システムの両方のオリエン時代で機能する双方向の要素です。この研究では、TRP4遺伝子全体のコンテキストで3 '末端形成の役割を分析しました。TRP4の3 '非翻訳領域(3'UTR)が変更され、TRP4遺伝子発現への影響について変化を分析しました。逆方向の3'utrは完全に機能的であり、Trp4遺伝子発現に影響しませんでした。双方向ARO4または単方向GCN4 3 '末端形成要素によってTRP4 3'UTRを交換すると、効率的な遺伝子発現が可能になりました。TRP4 3'UTR全体の削除により、TRP4 mRNAが70%減少し、野生型と比較して特定のTRP4酵素活性が50%減少しました。TRP4 3'UTR内の単一点突然変異は、遺伝子発現に同じ効果を引き起こしました。この点突然変異は、3 '末端形成の効率に影響を与えるだけでなく、野生型ポリ(a)サイトの上流に位置する新しいポリ(a)部位を生成しました。したがって、TRP4 3'utrのこのシーケンスモチーフは、効率と位置決め要素の両方として同時に機能します。

酵母TRP4 mRNA 3 '末端形成要素は、人工in vivo試験システムの両方のオリエン時代で機能する双方向の要素です。この研究では、TRP4遺伝子全体のコンテキストで3 '末端形成の役割を分析しました。TRP4の3 '非翻訳領域(3'UTR)が変更され、TRP4遺伝子発現への影響について変化を分析しました。逆方向の3'utrは完全に機能的であり、Trp4遺伝子発現に影響しませんでした。双方向ARO4または単方向GCN4 3 '末端形成要素によってTRP4 3'UTRを交換すると、効率的な遺伝子発現が可能になりました。TRP4 3'UTR全体の削除により、TRP4 mRNAが70%減少し、野生型と比較して特定のTRP4酵素活性が50%減少しました。TRP4 3'UTR内の単一点突然変異は、遺伝子発現に同じ効果を引き起こしました。この点突然変異は、3 '末端形成の効率に影響を与えるだけでなく、野生型ポリ(a)サイトの上流に位置する新しいポリ(a)部位を生成しました。したがって、TRP4 3'utrのこのシーケンスモチーフは、効率と位置決め要素の両方として同時に機能します。

The yeast TRP4 mRNA 3' end formation element is a bidirectional element which functions in both orien-tations in an artificial in vivo test system. In this study, the role of 3' end formation was analysed in the context of the entire TRP4 gene. The 3' untranslated region (3'UTR) of TRP4 was altered and changes were analysed for their influence on TRP4 gene expression. The 3'UTR in reverse orientation was fully functional and did not affect TRP4 gene expression. Exchanging the TRP4 3'UTR by the bidirectional ARO4 or the unidirectional GCN4 3' end formation element allowed efficient gene expression. Deletion of the entire TRP4 3'UTR resulted in 70% reduction of TRP4 mRNA and 50% reduced specific Trp4 enzyme activity in comparison to wild-type. A single point mutation within the TRP4 3'UTR caused the same effect on gene expression. This point mutation did not only affect the efficiency of 3' end formation, but also produced new poly(A) sites which were situated upstream of the wild-type poly(A) sites. Therefore this sequence motif in the TRP4 3'UTR acts simultaneously as both an efficiency and positioning element.

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