ヒトハプトグロビンのベータ鎖のシアン臭化片の特性評価

ヒトハプトグロビンのベータ鎖のシアン臭化（CNBR）断片の特性評価により、4つのメチオニル残基の切断に起因する5つの主要な断片が明らかになりました。断片は、セファロース6bおよびバイオゲルP10およびP60のグアニジンHClのゲルろ過によって分離されました。5つのシアンブロマイドフラグメントの組成分析は、無傷のベータ鎖で決定された残基の数と一致して、248-253アミノ酸残基を占めました。炭水化物のほとんどはCNBR IIに付着していました。ハプトグロビンベータ鎖およびシアンブロマイドフラグメントのカルボキシペプチダーゼによるカルボキシル末端加水分解と、自動化されたアミノ末端配列分析とカルボキシル末端加水分解は、139残基、またはベータ鎖分子の約55％を同定しました。ベータ鎖分子内のフラグメントの配置は、ベータ鎖全体とプラスミン切断断片の配列分析によって確立されました。CNBR Vの位置は、ホモセリンまたはホモセリンラクトンがないことによって確認されました。無傷のハプトグロビン1-1のシアン臭化反応は、単一のジスルフィド結合により無傷のアルファ1鎖に共有結合して結合したベータ鎖フラグメントCNBR IIIの分離をもたらしました。ベータ鎖は、セリンエプロテーゼのキモトリプシンファミリーと主要な構造的類似性を持つことが示されました。CNBR vの部分配列分析は、セリン-195アクティブサイト領域に匹敵する領域を確立しました： / asp-thr-cys-tyr-gly-gly-asp-ala-gly-ser-ala-phe /（残基189-199、Chymotrypsinogen a番号）。アクティブサイトセリン-195はアラニンに置き換えられます。ただし、トリプシン様酵素であるASP-189の特異性残基は保存されています。最大15％の収量で、いくつかのマイナーなシアン臭化切断産物も同定されました。これらのマイナーな切断生成物は、タンパク質または糖タンパク質のトリプトファニル残基が臭化シアンの切断にも影響を受けやすいという証拠を与えています。

Characterization of the cyanogen bromide (CNBr) fragments of the beta chain of human haptoglobin revealed five major fragments resulting from cleavage of four methionyl residues. The fragments were isolated by gel filtration in guanidine-HCl on Sepharose 6B and Bio-Gel P10 and P60. Compositional analyses of the five cyanogen bromide fragments accounted for 248-253 amino acid residues in agreement with the number of residues determined for the intact beta chain. Most of the carbohydrate was attached to CNBr II. Automated amino-terminal sequence analysis and carboxyl-terminal hydrolysis with carboxypeptidase of the haptoglobin beta chain and cyanogen bromide fragments identified 139 residues, or about 55% of the beta-chain molecule. The placement of the fragments within the beta-chain molecule was established by sequence analysis of whole beta chain and a plasmin cleavage fragment. The position of CNBr V was confirmed by the absence of homoserine or homoserine lactone. Cyanogen bromide reaction of intact haptoglobin 1-1 resulted in the isolation of a beta-chain fragment, CNBr III, covalently attached to the intact alpha1 chain by a single disulfide bond. The beta chain was shown to have primary structural similarities to the chymotrypsin family of serin eproteases. Partial sequence analysis of CNBr V established the region which is comparable to the serine-195 active-site region: /Asp-Thr-Cys-Tyr-Gly-Asp-Ala-Gly-Ser-Ala-Phe/ (residues 189-199, chymotrypsinogen A numbering). The active-site serine-195 is replaced by alanine; however, the specificity residue of the trypsin-like enzymes, Asp-189, is preserved. Several minor cyanogen bromide cleavage products were also identified in yields of up to 15%. These minor cleavage products give evidence that tryptophanyl residues in proteins, or glycoproteins, are also susceptible to cyanogen bromide cleavage.